AHG
TEST À L’ANTIGLOBULINE HUMAINE
(TEST DE COOMBS)
Réf. Catalogue
1/312i 10ml (vert) ; 1/304i 10ml (incolore)
1/312 10 x 10ml (vert) ; 1/312c 10 x 10ml (incolore)
1/312-1L 1000ml (vert) ; 1/312C-1L1000ml (incolore)
INTRODUCTION
Ce réactif polyspécifique est exclusivement pour usage
professionnel diagnostique in vitro pour la détection
de l’IgG et des anticorps érythrocytaires de liaison de
complément par tests directs et indirects à l’antiglobuline.
Les anticorps (immunoglobulines) peuvent s’attacher à la
surface des cellules érythrocytaires humaines in vivo ou
in vitro. Un revêtement in vivo peut se présenter si
l’organisme produit un auto-anticorps s’opposant à un
autoantigène situé sur les érythrocytes de l'organisme
même. Un revêtement in vitro peut se présenter au cours
de tests sur de détermination du groupe sanguin, de tests
de compatibilité avant transfusion et de tests visant à
détecter et observer les anticorps atypiques.
Les tests doivent être lus conformément au protocole
‘tip and roll". Des secousses excessives peuvent
rompre une faible agglutination et produire de faux
résultats négatifs.
Si des dispositifs automatiques de lavage de cellules
sont utilisés, les performances et la propreté de
l’instrument devront être contrôlées fréquemment.
Des faux résultats peuvent apparaître suite à
contamination du matériel de test, à une mauvaise
température de réaction, à des conditions
inappropriées de conservation du matériel, à
l’omission du réactif de test et à certains états
pathologiques.
Aucun test ne peut détecter tous les anticorps
cliniquement significatifs.
Il n’existe aucune garantie que les produits dérivés
de sources humaines ou animales ne sont pas
susceptibles de transmettre des agents infectieux. Il
convient donc de faire particulièrement attention
dans la manipulation et l’élimination de ce produit.
CONTENU DU PRODUIT
Le réactif à l’antiglobuline humaine de BIOTEC contient
de l’IgG anti-humaine ovine et de l’anti-C3d humaine. Il
contient également <0,1 % d’azide de sodium comme
agent de conservation.
Le produit fini contient ce qui suit :
Réactif à l’antiglobuline humaine: 10ml (1/312i &
1/304i) ou 10x10ml (1/312 & 1/312c) ou 1000ml
(1/312-1L & 1/312C-1L)
1 mode d’emploi
MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI
Solution saline physiologique (0,85 % NaCl, pH 7,0)
Albumine bovine à 22% ou 30%
Tubes ou lames pour essais
Contrôles (voir ‘Contrôle de Qualité’)
Pipettes
Centrifugeuse
CONSERVATION ET DURÉE DE
CONSERVATION
Conserver entre 2 et 8C.
Ne pas utiliser en cas de turbidité ou de présence de
précipité ou particules.
Ne pas diluer.
Le réactif est stable jusqu’à la date de péremption
inscrite sur l’étiquette du produit.
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS
Il est conseillé aux utilisateurs de s’assurer avec soin
du caractère approprié du réactif avant usage dans
des méthodes alternatives.
Un lavage insuffisant des érythrocytes peut
provoquer une neutralisation du réactif à
l’antiglobuline humaine.
2008/03/19
Antiglobuline Humaine
Après complétion de la phase de lavage, tout excès
de solution saline résiduelle pourrait diluer le réactif à
l’antiglobuline
humaine
au-delà
des
taux
recommandés si ajoutée.
Notez que les conditions recommandées pour la
centrifugeuse sont exprimées comme force
centrifuge relative ou FCR. Voir les orientations du
fabricant de la centrifugeuse pour les paramètres
équivalents.
PRÉPARATION DU SPÉCIMEN
Les spécimens doivent être prélevés au moyen de
techniques aseptiques avec ou sans anticoagulant. Des
tests directs à l’antiglobuline doivent toutefois être
effectués avec des cellules fraîches prélevées dans un
anticoagulant à l’EDTA afin d’éviter toute sensibilisation
in vitro avec le complément.
Le spécimen doit être testé aussi rapidement que
possible après le prélèvement. Si le test est repoussé, le
spécimen doit être conservé entre 2 et 8°C. Des
spécimens sanguins présentant un fort degré d’hémolyse
ou de contamination ne doivent pas être utilisés. Des
spécimens coagulés ou ceux prélevés dans de l’EDTA
doivent être soumis aux tests dans les sept jours à
compter de la date du prélèvement.
PROTOCOLES
TEST INDIRECT: MÉTHODE SUR LAME
1. Préparer une suspension à 2-4% avec les
érythrocytes à soumettre au test dans une solution
saline (0,85% NaCl, pH 7,0).
2. Placer ce qui suit dans un petit tube de test:
2 volumes du sérum à tester
1 volume de suspension érythrocytaire à 2-4%
1 volume d’albumine bovine BIOTEC à 22 ou
30%.
3. Bien mélanger et laisser incuber à 37°C pendant 30
minutes.
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Rév. 4 (French)
BIOTEC Laboratories Ltd 32 Anson Road Martlesham Heath Ipswich Suffolk IP5 3RG Royaume-Uni
Tél. : +44 (0) 1473 612158 Fax : +44 (0) 1473 611476 Site Internet : www.biotec.com Email : technical@biotec.com
AHG
4.
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7.
8.
Laver les cellules 4 fois dans de grosses quantités
de solution saline physiologique. Laisser décanter
complètement au dernier lavage.
Remettre en suspension les cellules à 2-4% dans
une solution saline physiologique.
Mélanger ce qui suit sur une plaque ou une lame
propre.
1 volume de réactif BIOTEC à l’antiglobuline
humaine
1 volume de cellules lavées en suspension à 24%
Laisser reposer à température ambiante pendant 5
minutes.
Faire balancer doucement la plaque et chercher des
signes d’agglutination sur une source lumineuse.
TEST INDIRECT: MÉTHODE EN TUBE
1. Préparer une suspension à 2-4% avec les
érythrocytes à soumettre au test dans une solution
saline physiologique (0,85% NaCl, pH 7,0).
2. Placer ce qui suit dans un petit tube de test:
2 volumes du sérum à tester
1 volume de suspension érythrocytaire à 2-4%
1 volume d’albumine bovine BIOTEC à 22 ou
30%.
3. Bien mélanger et laisser incuber à 37°C pendant 30
minutes.
4. Laver les cellules 4 fois dans de grosses quantités
de solution saline physiologique. Laisser décanter
complètement au dernier lavage.
5. Ajouter 2 volumes de réactif BIOTEC à l’antiglobuline
humaine
6. Bien mélanger et centrifuger à 100 FCR (1000 t/min)
pendant 1 minute.
7. Agiter
le
tube
doucement
et
examiner
macroscopiquement pour détecter toute trace
d’agglutination. Les négatifs peuvent être examinés
au microscope.
4.
5.
INTERPRÉTATION
Résultats
Agglutination
Aucune agglutination
= résultat positif
= résultat négatif
Contrôle de Qualité
Pour chaque lot d’essais de dépistage d’anticorps
entrepris par test à l’antiglobuline humaine, un contrôle
positif et un autre négatif doivent être prévus.
Le contrôle positif doit être un anti-D faible (0,2 IU/ml); le
contrôle négatif doit être un sérum inerte soumis à
épreuve par confrontation aux cellules de dépistage
d'anticorps utilisées. Si le contrôle positif à anti-D faible
a été dilué pour utilisation, il doit être dilué dans du sérum
ou du plasma pour servir de contrôle de lavage
(remarque: si le diluant est une solution saline/albumine
bovine, le test de contrôle pourrait être positif même si le
lavage de cellule était sous-optimal et suffisant à donner
un résultat atténué ou faussement négatif avec un
échantillon contenant des anticorps).
CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE
Les érythrocytes positifs au test direct à l’antiglobuline ne
doivent pas être utilisés dans le test indirect à
l’antiglobuline.
RÉFÉRENCES
1.
TEST DIRECT: MÉTHODE SUR LAME
1. Laver les cellules à tester dans de grosses quantités
de solution saline physiologique. Laisser décanter
au dernier lavage.
2. Préparer une suspension à 2-4% d’érythrocytes
lavés dans une solution physiologique saline.
3. Mélanger ce qui suit sur une plaque ou une lame
propre:
1 volume de réactif BIOTEC à l’antiglobuline
humaine
1 volume de suspension érythrocytaire à 2-4%
4. Laisser reposer à température ambiante pendant 5
minutes.
5. Faire balancer doucement la plaque et chercher des
signes d’agglutination sur une source lumineuse.
2 volumes de réactif BIOTEC à l’antiglobuline
humaine
1 volume de suspension érythrocytaire à 5%.
Mélanger et centrifuger à 100 FCR (1000 t/min)
pendant 1 minute.
Agiter
le
tube
doucement
et
examiner
macroscopiquement pour détecter toute trace
d’agglutination. Les négatifs peuvent être examinés
au microscope.
2.
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the
e
United Kingdom. 3 édition. 1996.
Flynn, J. C Jr., Essentials of Immunohaematology.
W. B. Saunders Company, 1998.
TEST DIRECT: MÉTHODE EN TUBE
1. Laver les érythrocytes à tester 4 fois dans de
grosses quantités de solution saline physiologique.
Laisser décanter complètement au dernier lavage.
2. Remettre en suspension les érythrocytes à 5% dans
une solution saline physiologique.
3. Placer ce qui suit dans un petit tube de test :
2008/03/19
Antiglobuline Humaine
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Rév. 4 (French)
BIOTEC Laboratories Ltd 32 Anson Road Martlesham Heath Ipswich Suffolk IP5 3RG Royaume-Uni
Tél. : +44 (0) 1473 612158 Fax : +44 (0) 1473 611476 Site Internet : www.biotec.com Email : technical@biotec.com
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