Instrument MiSeqDx
3 Tapotez doucement la cartouche sur la paillasse pour réduire les bulles dʼair dans les réactifs.
REMARQUE
Les tubes des dispositifs dʼaspiration MiSeqDx descendant au fond de chaque réservoir pour aspirer les réactifs, il est important quʼaucune bulle dʼair ne reste dans les réservoirs.
4 Placez la cartouche de réactifs sur la glace ou réservez-la à une température comprise entre 2 et 8 °C (jusqu’à
6 heures) jusqu’à ce que vous soyez prêt à configurer lʼanalyse. Pour obtenir de meilleurs résultats, chargez directement l’échantillon et configurez lʼanalyse.
Préparer des échantillons pour le séquençage
1 Ramenez le Tampon de dilution de librairie à température ambiante. Agitez le Tampon de dilution de librairie et assurez-vous que tous les précipités sont complètement dissous.
2 Si la plaque SGP a été conservée congelée, décongelez la plaque SGP à température ambiante.
3 Centrifugez la plaque SGP à 1 000 × g à 20 °C pendant une minute.
4 Mettez en route un tube Eppendorf frais (ci-après désigné comme le tube PAL).
5 Déterminez les échantillons à regrouper pour le séquençage. Un maximum de 48 échantillons peut être regroupé pour le séquençage.
6 Si la plaque SGP a été conservée congelée, mélangez chaque librairie à séquencer en pipettant de haut en bas de 3 à 5 fois.
7 Transférez 5 µL de chaque librairie à séquencer de la plaque SGP , colonne par colonne, à une barrette de huit tubes PCR. Scellez la SGP avec un timbre adhésif pour plaque et réservez.
REMARQUE
Après utilisation, conservez la plaque SGP scellée à une température de -25 °C à -15 °C. La plaque SGP scellée est stable pendant un maximum de trois jours.
8 Combinez et transférez les contenus de la barrette de huit tubes PCR dans le tube PAL. Mélangez le tube PAL complètement.
9 Mettez en route un tube Eppendorf frais (ci-après désigné comme le tube DAL).
10 Ajoutez 585 µL de Tampon de dilution de librairie au tube DAL.
11 Ajoutez 6 µL de Contrôle interne PhiX de 20 pM au tube DAL. Pipettez de haut en bas de 3 à 5 fois pour rincer l'embout et assurer un transfert total.
12 Transférez 9 µL du PAL dans le tube DAL contenant Tampon de dilution de librairie. Pipettez de haut en bas de 3 à 5 fois pour rincer l'embout et assurer un transfert total.
13 Mélangez le tube DAL sous agitateur vortex à une vitesse maximale.
14 Centrifugez le tube DAL à 1 000 × g à 20 °C pendant 1 minute.
15 Incubez le tube DAL sur un bloc chauffant à 96 °C pendant 2 minutes.
16 Après l’incubation, inversez le tube DAL 1 ou 2 fois pour mélanger, puis placez immédiatement dans un bain d’eau glacée.
17 Gardez le tube DAL dans un bain d’eau glacée pendant 5 minutes.
Chargement des librairies d’échantillons sur la cartouche
1 Utilisez un embout de pipette de 1 mL séparé, propre et vide pour percer l’opercule qui scelle le réservoir, sur la cartouche de réactifs étiquetée Load Samples (Charger les échantillons).
2 À l’aide de la pipette, transférez 600 µL de librairies d’échantillons DAL dans le réservoir Load Samples
(Charger les échantillons). Prenez soin de ne pas toucher à l’opercule lors de la dispersion de l’échantillon.
Vérifiez s’il y a des bulles d’air dans le réservoir après le chargement de l’échantillon. Si des bulles d’air sont présentes, tapotez légèrement la cartouche sur la paillasse pour les libérer.
3 Passez directement à la configuration de l’analyse depuis l’interface du Logiciel d’exploitation de MiSeq (MOS).
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| nº 15070068 Rév. A FRA
Mars 2015
