Biokar diagnostics BM144 Manuel utilisateur

FICHE TECHNIQUE
IRIS SALMONELLA®
DETECTION DES SALMONELLES MOBILES ET IMMOBILES
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BM16008
BM16108
BS07808
BS07708
BT01108
DOMAINE D’UTILISATION
®
IRIS Salmonella constitue une méthode alternative de recherche des salmonelles dans les produits d’alimentation
humaine et animale, ainsi que dans les échantillons de l’environnement (à l’exclusion des échantillons de production
primaire).
Les analyses peuvent être déclarées négatives dès 37 heures après les étapes d’enrichissement (Salmonella
®
Enrichissement) et de différenciation (IRIS Salmonella Agar).
La méthode permet la détection de toutes les salmonelles, mobiles et immobiles.
La confirmation d’éventuels échantillons présomptivement positifs sera réalisée à l’aide d’un test Latex (CONFIRM’
Salmonella) ou par les tests classiques décrits dans les méthodes normalisées.
®
La méthode IRIS Salmonella est également validée pour les prises d’essai de 50 g à 375 g pour les poudres de lait
(incluant les poudres de lait infantile avec et sans probiotiques) et de 50 g à 125 g pour les farines et les croquettes
utilisées dans l’alimentation animale.
®
IRIS Salmonella est officiellement certifié NF VALIDATION, sous Attestation N° BKR 23/07 - 10/11, dont le terme de
validité est fixé au 07 octobre 2015.
BKR 23/07-10/11
METHODES ALTERNATIVES D’ANALYSE
POUR L’AGROALIMENTAIRE
Certifié par AFNOR Certification www.afnor-validation.org
2
PRINCIPES
ème
3
•
L’étape de dilution au 1/10
du produit à analyser est réalisée conformément aux recommandations de la
norme NF EN ISO 6579 dans le bouillon Salmonella Enrichissement. La formule de Salmonella
Enrichissement est conforme à celle de l’eau peptonée tamponnée.
•
L’étape d’enrichissement est réalisée en ajoutant le supplément sélectif IRIS Salmonella au bouillon
préalablement mélangé avec l’échantillon à analyser. Le bouillon obtenu, Salmonella Enrichissement, est
alors incubé pendant 18 heures ± 2 heures à 41,5 ± 1,0 °C pour le protocole général 25 g et 18 à 24 heures
pour les protocoles 125 g et 375 g.
•
L’étape de différenciation est mise en œuvre par ensemencement de 10 μL sur IRIS Salmonella Agar et
incubation pendant 24 heures ± 3 heures à 37 °C. Les salmonelles donnent des colonies magenta tandis que
les colonies des autres espèces sont bleues, violacées ou incolores.
•
L’éventuelle étape de confirmation peut être réalisée par les tests classiques décrits dans les méthodes
normalisées ou par CONFIRM’ Salmonella (test au latex), directement à partir d’une colonie magenta isolée
®
sur IRIS Salmonella Agar.
®
®
FOCUS SUR IRIS SALMONELLA® AGAR
®
Les études réalisées avec IRIS Salmonella Agar démontrent sa grande spécificité pour la détection des
salmonelles, y compris les espèces et les sérovars atypiques, sources de confusions sur d’autres milieux.
Ainsi, la mise en évidence des Salmonella Typhi et Paratyphi, des Salmonella lactose-positif (Salmonella Senftenberg
et sous-espèces S. arizonae et S. diarizonae), des souches saccharose-positif est assurée.
Le milieu permet la détection des sérovars immobiles (S. Pullorum et S. Gallinarum) ou des souches monophasiques.
Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
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®
IRIS Salmonella Agar permet également de détecter les souches présentant une activité estérasique faible à nulle
sur d’autres milieux (Salmonella bongori, Salmonella Dublin et Atento, quelques unes des sous-espèces S. enterica
S. houtenae et S. diarizonae).
Les agents sélectifs assurent l’inhibition des bactéries à Gram positif et de certaines bactéries à Gram négatif.
®
IRIS Salmonella Agar peut également être utilisée dans les méthodes normalisées pour la recherche de
Salmonella, comme second milieu d’isolement.
4
PREPARATION
Préparation du milieu déshydraté Salmonella Enrichissement :
• Mettre en solution 20,0 g de milieu déshydraté (BK194) dans 1 litre d’eau
distillée ou déminéralisée.
•
Agiter lentement, jusqu’à dissolution complète.
•
Répartir en tubes ou en flacons.
•
Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 minutes.
5
 Reconstitution:
20,0 g/L
Stérilisation:
15 min à 121°C
M ODE D ’ EMPLOI
Respecter les bonnes pratiques de laboratoire (se référer à la norme NF EN ISO 7218).
Protocole général pour les prises d’essai de 25 g :
Enrichissement
•
Introduire aseptiquement (x) g de produit à analyser dans 9 (x) mL de
Salmonella Enrichissement (se référer à la fiche technique BK194, BM136,
BM137 et BM144).
•
Homogénéiser parfaitement.
•
Introduire le supplément liquide IRIS Salmonella à raison de 0,1 mL/g
d’échantillon (soit 2,5 mL pour 25 g) pour le supplément liquide (BS078).
 Enrichissement avec
supplément
 Incubation :
18 h à 41,5 °C
®
ou
®
ème
•
Introduire un comprimé de supplément IRIS Salmonella (BS077) pour 25 g d’échantillon (dilué au 1/10
dans Salmonella Enrichissement).
•
Homogénéiser.
•
Incuber le bouillon à 41,5 ± 1,0 °C pendant 18 heures ± 2 heures.
Notes :
•
Pour des raisons d’organisation des laboratoires, l’incubation peut être poursuivie jusqu’à 24 heures.
•
De la même façon, les bouillons peuvent ensuite être conservés 3 jours à 2-8°C avant repiquage sur IRIS
®
Salmonella Agar
•
Dans le cadre de la marque NF VALIDATION, les prises d’essai supérieures à 25 g n’ont pas été testées.
Isolement
•
Repiquer 10 μL de l’enrichissement obtenu sur IRIS Salmonella Agar.
•
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 heures ± 3 heures.
®
 Repiquage 10 µL
 Incubation :
24 h à 37 °C
Note : Pour des raisons d’organisation des laboratoires, les géloses peuvent ensuite
être conservées 3 jours à 2-8 °C avant d’être lues et de réaliser les éventuelles confirmations.
Protocole 50 g à 375 g pour les poudres de lait :
Enrichissement
•
Introduire aseptiquement (x) g de produit à analyser dans 9 (x) mL de Salmonella Enrichissement
préalablement préchauffé à 41,5 °C ± 1,0 °C.
•
Homogénéiser parfaitement.
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Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
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•
®
Introduire le supplément liquide IRIS Salmonella à raison de 0,1 mL/g
d’échantillon (soit 37,5 mL pour 375 g d’échantillon) pour le supplément
liquide (BS078).
ou
®
•
Introduire un comprimé de supplément IRIS Salmonella (BS077) pour 25 g
ème
dans Salmonella Enrichissement).
d’échantillon (dilué au 1/10
•
Homogénéiser.
•
Incuber le bouillon à 41,5 ± 1,0 °C pendant 18 à 24 heures.
 Enrichissement avec
supplément
 Incubation :
18 à 24 h à 41,5 °C
Notes :
•
Pour des raisons d’organisation des laboratoires, les bouillons peuvent être conservés 3 jours à 2-8°C
®
avant repiquage sur IRIS Salmonella Agar.
•
Dans le cadre de la marque NF VALIDATION, seules les prises d’essai comprises entre 50 g et 375 g ont été
testées pour les poudres de lait (incluant les poudres de lait infantile avec et sans probiotiques).
Isolement
 Repiquage 10 µL
•
Repiquer 10 μL de l’enrichissement obtenu sur IRIS Salmonella Agar.
•
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 heures ± 3 heures.
®
 Incubation :
24 h à 37 °C
Note : Pour des raisons d’organisation des laboratoires, les géloses peuvent ensuite être conservées 3 jours à 2-8 °C
avant d’être lues et de réaliser les éventuelles confirmations.
Protocole 50 g à 125 g pour les farines ou croquettes dans l’alimentation animale :
Enrichissement
•
Introduire aseptiquement (x) g de produit à analyser dans 9 (x) mL de Salmonella Enrichissement
préalablement préchauffé à 41,5°C ± 1,0 °C.
•
Homogénéiser parfaitement.
•
Introduire le supplément liquide IRIS Salmonella à raison de 0,1 mL/g
d’échantillon (soit 12,5 mL pour 125 g d’échantillon) pour le supplément
liquide (BS078).
®
ou
®
•
Introduire un comprimé de supplément IRIS Salmonella (BS077) pour 25 g
ème
dans Salmonella Enrichissement).
d’échantillon (dilué au 1/10
•
Homogénéiser.
•
Incuber le bouillon à 41,5 ± 1,0 °C pendant 18 à 24 heures.
 Enrichissement avec
supplément
 Incubation :
18 à 24 h à 41,5 °C
Notes :
•
Dans le cadre de la marque NF VALIDATION, seules les prises d’essai comprises entre 50 g et 125 g ont été
testées pour les farines ou croquettes dans l’alimentation animale.
Isolement
 Repiquage 10 µL
•
Repiquer 10 μL de l’enrichissement obtenu sur IRIS Salmonella Agar.
•
Incuber à 37 ± 1 °C pendant 24 heures ± 3 heures.
®
 Incubation :
24 h à 37 °C
Note : Pour des raisons d’organisation des laboratoires, les géloses peuvent ensuite être conservées 3 jours à 2-8 °C
avant d’être lues et de réaliser les éventuelles confirmations.
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LECTURES
L’aspect des colonies est le suivant :
Microorganismes
Caractéristiques des colonies
Salmonella spp.
(y compris Salmonella Typhi, Paratyphi, lactose-positif,
saccharose-positif, immobile, monophasique, Dublin, bongori)
Escherichia coli
Enterobacter spp., Klebsiella spp.
Rosé à Magenta
Incolores
Bleu-vert à violet
Proteus spp.
Incolores à brunâtres
Gram positif
Inhibés
Voir ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO.
7
CONFIRMATIONS
Dans le cadre de la marque NF VALIDATION, tous les résultats positifs doivent être confirmés de l’une des manières
suivantes :
•
Option 1 : Mise en œuvre des tests classiques décrits dans les méthodes normalisées par le CEN ou l’ISO (en
®
incluant l’étape de purification), en repartant d’une colonie magenta isolée sur IRIS Salmonella Agar.
•
Option 2 : Mise en œuvre de CONFIRM’ Salmonella (test au latex) à partir d’une colonie isolée.
En cas de résultats discordants (positifs par la méthode alternative, non confirmés par l’une des options décrites cidessus, et en particulier par le(s) test(s) Latex), le laboratoire devra mettre en œuvre les moyens suffisants pour
s’assurer de la validité du résultat rendu. Il est possible par exemple de procéder à des tests biochimiques ou encore
d’utiliser des sondes nucléiques tels que décrit dans la norme NF EN ISO 7218.
8
FORMULES-TYPES
Ces formules-types peuvent être ajustées de façon à obtenir des performances optimales.
Salmonella Enrichissement (BK194, BM136, BM137 ou BM144), pour 1 litre de milieu :
- Peptone ................................................................................................................... 10,00 g
- Chlorure de sodium ................................................................................................... 5,00 g
- Tampon phosphates ............................................................................................... 5,06 g
®
IRIS Salmonella Supplément (1 comprimé) :
- Système sélectif ......................................................................................................... 0,1 g
- Colorant ................................................................................................................... 0,005 g
®
IRIS Salmonella Supplément Liquide (flacon de 50 mL) :
- Système sélectif ............................................................................................................ 2 g
- Colorant ....................................................................................................................... 0,1 g
®
IRIS Salmonella Agar, pour 1040 mL de gélose :
- Peptone .................................................................................................................... 10,0 g
- Extrait de levure .......................................................................... ................................5,0 g
- Chlorure de sodium .................................................................................................... 5,0 g
- Tampon phosphate ..................................................................................................... 7,0 g
- Agents inhibiteurs ...................................................................................................... 10,2 g
- Mélange chromogène ................................................................................................. 1,0 g
- Agar agar bactériologique ....................................................................................... 16,0 g
- Opacifiant .................................................................................................................. 30 mL
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,0 ± 0,2.
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CONTROLE QUALITE
Aspect du milieu en boîte : gélose blanche, opaque.
Réponse culturale de croissance après 24 heures d’incubation à 37°C (XP CEN ISO/TS 11133) :
Microorganismes
Salmonella Typhimurium
Salmonella Enteritidis
Enterobacter aerogenes
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
10
Croissance
WDCM 00031
WDCM 00030
WDCM 00175
WDCM 00013
WDCM 00034
WDCM 00025
Bonne, colonies magenta
Bonne, colonies magenta
Bonne, colonies bleues
Partiellement inhibée, colonies incolores
Inhibée
Inhibée
CONSERVATION
Salmonella Enrichissement : Milieu déshydraté : 2-30 °C.
Milieu préparé en flacons ou en tubes : Se référer à la norme XP CEN ISO/TS 11133-1.
Milieux prêts-à-l’emploi en flacons ou en poches : 2-25 °C.
®
®
Supplément IRIS Salmonella Liquide, Supplément IRIS Salmonella Comprimés : 2-8 °C.
®
IRIS Salmonella Agar : Milieu pré-coulé en boîtes de Petri (Ø 90 mm) : 2-8 °C.
Kit CONFIRM’ Salmonella : 2-8 °C.
Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes.
11
PRESENTATION
Salmonella Enrichissement :
Flacon de 500 g .................................................................................................................................................
Fût de 5 kg .........................................................................................................................................................
10 flacons de 225 mL .........................................................................................................................................
3 poches souples de 3 litres ..............................................................................................................................
2 poches souples de 5 litres ..............................................................................................................................
BK194HA
BK194GC
BM13608
BM13708
BM14408
®
IRIS Salmonella Supplément :
10 flacons de 50 mL ............................................................................................................................................ BS07808
120 comprimés ................................................................................................................................................... BS07708
®
IRIS Salmonella Agar :
20 boîtes de Petri (Ø 90 mm) ............................................................................................................................. BM16008
120 boîtes de Petri (Ø 90 mm) .......................................................................................................................... BM16108
CONFIRM’ Salmonella :
Kit d’agglutination au Latex ................................................................................................................................. BT01108
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
NF EN ISO 6579. Décembre 2002. Microbiologie des aliments - Méthode horizontale pour la Recherche des
Salmonella spp.. Modifiée en Octobre 2007 par l’amendement A1 : annexe D : recherche de Salmonella spp. dans les
matières fécales des animaux et dans des échantillons environnementaux au stade de la production primaire.
NF EN ISO 16140. Octobre 2003. Microbiologie des aliments. Protocole pour la validation des méthodes alternatives.
Modifiée en Octobre 2011 par l’amendement A1.
NF EN ISO 7218. Octobre 2007. Microbiologie des Aliments. Exigences générales et recommandations. Modifiée en
Décembre 2013 par l’amendement A1.
Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – 60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
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AUTRES INFORMATIONS
®
IRIS Salmonella est une marque déposée de SOLABIA S.A.S.
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce
document. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document
Date création
Date de révision
Motif de révision
:
:
:
:
BM160/FR/2011-02 : 3.
02-2011
03-2014
Extension de validation.
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ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO
IRIS Salmonella® Agar
Détection des Salmonelles
Croissance obtenue après 24 heures d’incubation à 37 °C.
Enterobacter spp.
Aspect non caractéristique
De couleur bleue
Salmonella spp.
Aspect caractéristique
De couleur magenta
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