FICHE TECHNIQUE
GELOSE GLUCOSEE AU BCP
DENOMBREMENT DES SPORES DE BACTERIES AEROBIES
1
BK042HA
BM16808
DOMAINE D’UTILISATION
La gélose glucosée au pourpre de bromocrésol (BCP) est utilisée pour le dénombrement des spores de bactéries
aérobies mésophiles et thermophiles (notamment Bacillus stearothermophilus responsable du “flat sour”) dans les
matières premières et ingrédients entrant dans la composition des conserves non acides (pH > 4,5) ainsi que les
prélèvements de surface et dans les eaux de process des conserveries.
2
HISTORIQUE
Le milieu a été développé par les laboratoires de la National Canners Association pour le dénombrement des germes
aérobies mésophiles et thermophiles dans le sucre employé dans les conserves alimentaires.
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PRINCIPES
L’amidon soluble, qui est un agent protecteur, favorise la germination des spores.
Les germes qui acidifient le milieu à partir du glucose font virer au jaune l’indicateur de pH, le pourpre de
bromocrésol.
Les colonies non acidifiantes sont bleues.
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PREPARATION
Mettre en suspension 32,0 g de milieu déshydraté (BK042) dans 1 litre d’eau
distillée ou déminéralisée.
Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir
durant le temps nécessaire à sa dissolution.
Répartir en tubes ou en flacons.
Reconstitution:
32,0 g/L
Stérilisation:
15 min à 121°C
Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
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MODE D’EMPLOI
Avec le milieu prêt-à-être liquéfier BM168 (ou bien si le milieu
est préparé à l’avance, à partir du milieu déshydraté), faire
fondre la gélose pendant le minimum de temps nécessaire à sa
reliquéfaction totale.
Chauffer le produit à analyser 10 minutes à 95-100°C afin de
détruire les formes végétatives et d’activer les spores.
Transférer l’inoculum dans des boîtes de Petri stériles.
Couler 15 mL de milieu préalablement maintenu à 47°C.
Homogénéiser parfaitement.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Préparation de l’échantillon:
10 min à 95-100°C
Ensemencement:
En profondeur, en double couche
Incubation :
- bactéries mésophiles :
48 ± 3 h à 37 ± 1°C
- bactéries thermophiles :
48 ± 3 h à 55 ± 1°C
Ajouter une couche de 5 à 10 mL du même milieu de manière à
recouvrir la couche précédente et laisser solidifier.
Incuber :
- à 37 ± 1°C pendant 48 ± 3 heures, pour les bactéries mésophiles.
- à 55 ± 1°C pendant 48 ± 3 heures, pour les bactéries thermophiles, en prenant soin de couler dans le
couvercle des boîtes quelques gouttes d’huile de paraffine stérile pour assurer l’étanchéité.
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6
LECTURE
Pour les spores de bactéries mésophiles et thermophiles, dénombrer séparément les colonies acidifiantes (jaunes) et
les colonies non acidifiantes (bleues).
(voir ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO)
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FORMULE-TYPE
Formule-type pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales.
Pour 1 litre de milieu :
- Peptone ..................................................................................................................... 10,0 g
- Glucose ....................................................................................................................... 5,0 g
- Amidon soluble ............................................................................................................ 2,0 g
- Pourpre de bromocrésol ......................................................................................... 40,0 mg
- Agar agar bactériologique ......................................................................................... 15,0 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,0 ± 0,2.
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CONTROLE QUALITE
Milieu déshydraté : poudre beige vert, fluide et homogène.
Milieu prêt-à-l’emploi : gélose violette.
Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation :
Croissance
(Rapport de productivité : PR)
Microorganismes
1
Bacillus licheniformis
Geobacillus stearothermophilus
2
1
2
9
WDCM 00068
WDCM 00069
PR
PR
70%
70%
Incubation à 37°C (XP CEN ISO/TS 11133-2)
Incubation à 55°C
CONSERVATION
Milieu déshydraté : stocker entre 2 et 30°C. La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
Milieu préparé en tubes ou en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
Milieu prêt-à-l’emploi en flacons : stocker entre 2 et 8°C. La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
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PRESENTATION
Milieu de base déshydraté
Flacon de 500 g ............................................................................................................................................... BK042HA
Milieu prêt-à-liquéfier
10 Flacons de 200 mL ...................................................................................................................................... BM16808
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REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
National Canners Association. 1933. Bacterial Standards for Sugar.
XP CEN ISO/TS 11133-2/A1 (V 08-104-2/A1). Février 2011. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et
la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
NF V08-602. Mai 2011. Microbiologie des aliments - Dénombrement des spores dans les produits alimentaires avant
traitement d'appertisation par comptage des colonies.
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AUTRES INFORMATIONS
Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce
document et sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document
Date de création
Date de révision
Motif de la révision
:
:
:
:
BK042/F/2000-11 : 6.
11-2000
12-2012
Remaniement général
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ANNEXE 1 : SUPPORT PHOTO
Gélose glucosée au BCP
Le dénombrement des spores de bactéries aérobies mésophiles et thermophiles (notamment Bacillus
stearothermophilus).
Lecture :
Croissance obtenue après 48 heures d’incubation à 55 °C.
Bacillus thermophiles
Colonie caractéristique :
petite colonie jaune
(acidification du milieu) sur
le fond violet de la gélose.
Code produit :
BK042HA : Milieu déshydraté - Flacon de 500 g
BM16808 : Milieu prêt-à-liquéfier - 10 Flacons de 200 mL
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