Biokar diagnostics BM148 Manuel utilisateur

Gélose de CHAPMAN au mannitol
DOMAINE D’UTILISATION
La gélose de Chapman au mannitol permet l’isolement sélectif, la recherche et le dénombrement
des staphylocoques pathogènes dans le lait, les produits carnés, les produits de la mer, les autres
produits alimentaires, les produits pharmaceutiques, les produits cosmétiques et les prélèvements
biologiques d’origine animale. Elle est également employée au cours de l’examen bactériologique
des eaux filtrables telles que les eaux de piscine, de consommation humaine ou encore
d’établissements de soins.
HISTORIQUE
Les expériences de Koch ont montré que les staphylocoques supportent les milieux hypersalés à
7,5%. Chapman a confirmé ces premiers résultats en observant que les staphylocoques coagulant
le plasma de lapin présentaient des colonies jaunes sur le milieu auquel il a donné son nom, alors
que la plupart des autres bactéries étaient inhibées.
PRINCIPES
- La forte concentration en chlorure de sodium inhibe la croissance de la plupart des bactéries
autres que les staphylocoques.
- La fermentation du mannitol, mise en évidence par le virage au jaune de l’indicateur pH (rouge
de phénol), permet d’orienter le diagnostic.
- La mise en évidence des staphylocoques pathogènes devra être confirmée par la recherche de
la coagulase et, éventuellement, de la désoxyribonucléase et de la phosphatase.
PREPARATION
- Mettre en suspension 111,0 g de milieu déshydraté (BK030) dans 1 litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en tubes ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
NOTA :
Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la
consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement.
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Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
MODE D’EMPLOI
Cas général :
-
Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance).
Refroidir et maintenir à 44-47°C.
Couler en boîtes de Petri stériles.
Laisser solidifier sur une surface froide.
Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert.
Transférer 0,1 mL du produit à analyser et de ses dilutions décimales dans les boîtes de Petri.
Etaler l’inoculum à la surface du milieu à l’aide d’un étaleur stérile.
Incuber à 37°C pendant 24 et 48 heures.
Contrôle des eaux :
-
Faire fondre le milieu (s’il est préparé à l’avance).
Refroidir et maintenir à 44-47°C.
Couler en boîtes de Petri stériles (l’épaisseur de gélose doit être égale à 5 mm).
Laisser solidifier sur une surface froide.
Filtrer stérilement sur membrane un volume déterminé de l’échantillon à tester.
A la surface des boîtes ainsi préparées ou du milieu pré-coulé (BM148) ramené préalablement
à température ambiante, déposer la membrane en veillant à ce que le contact soit parfait.
- Incuber à (36 ± 2)°C pendant (44 ± 4) heures.
LECTURE
Les staphylocoques pathogènes forment des colonies luxuriantes, pigmentées, entourées d’une
auréole jaune due à la fermentation du mannitol. Les staphylocoques non pathogènes forment en
général de petites colonies rouges qui ne modifient pas la teinte du milieu. Quelques souches de
Staphylococcus epidermidis sont capables de fermenter le mannitol. Après 24-48 heures
d’incubation, quelques souches d’entérocoques, de Bacillus, de Micrococcus et de Serratia
peuvent cultiver.
FORMULE - TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone...........................................................................................5,0 g
- Peptone pepsique de viande ...........................................................5,0 g
- Extrait de viande ..............................................................................1,0 g
- Mannitol .........................................................................................10,0 g
- Chlorure de sodium .......................................................................75,0 g
- Rouge de phénol ........................................................................ 25,0 mg
- Agar agar bactériologique..............................................................15,0 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,4 ± 0,2.
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CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre rosée, fluide et homogène.
- Milieu préparé : gélose rouge.
- Réponse culturale de croissance après 24-48 heures d’incubation à 37°C (XP CEN ISO/TS
11133-2) :
Croissance
(Rapport de
productivité : PR)
Microorganismes
Staphylococcus aureus
DSM 799
PR ≥ 50%
Staphylococcus aureus
ATCC® 25923
PR ≥ 50%
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
bonne, score 2
Escherichia coli
inhibée, score 0
ATCC 25922
Caractéristiques
colonies jaunes, entourées d'une
auréole jaune
colonies jaunes, entourées d'une
auréole jaune
colonies roses, entourées d'une
zone rouge
- Réponse culturale de croissance après 44 heures d’incubation à 36°C (NF T 90-461) :
Croissance
(Rapport de
productivité)
Microorganismes
Staphylococcus aureus
CIP 53.154
66% ≤ R3 ≤ 150%
Enterococcus faecalis
CCM 2541
inhibée
Caractéristiques
colonies jaunes, entourées d'une
auréole jaune
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
- Milieu préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
- Milieu préparé en boîtes : 1 mois à 2-8°C (à titre indicatif).
Milieu pré-coulé en boîtes de Petri :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION
Code
Milieu complet pré-coulé en boîtes de Petri (Ø 55 mm) :
- Coffret de 20 boîtes
BM14808
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g
BK030HA
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SUPPORT PHOTO :
Référence : BK030HA, BM14808
Domaine d’utilisation : Isolement sélectif, la recherche et le dénombrement des staphylocoques pathogènes.
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Aspect caractéristique
Aspect non caractéristique
Colonies jaunes sur fond
jaune ou entourées d'un halo
jaune
Gélose de Chapman au mannitol
Réf : BK030HA
Incubation 24 heures à 37°C (surface)
Colonies caractéristiques jaunes sur fond jaune ou entourées d’un halo jaune
(fermentation du mannitol)
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Colonies blanches sur fond
rouge
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Chapman, G.H. 1945. The significance of sodium chloride in studies of staphylococci. J. Bacteriol., 50: 201.
Chapman, G.H. 1948. An improved Stone medium for the isolation and testing of food poisonning staphylococci. Food
Research, 13: 100-105.
Journal Officiel du 21 septembre 1968. Méthodes officielles de prélèvement et d'analyse bactériologiques des glaces et
crèmes glacées. (arrêté du 30 août 1968).
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la
production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
United States Pharmacopeia 29. 2006. Microbial Limit Tests, 2503-2508.
ISO 22718. Février 2006. Cosmétiques. Microbiologie. Détection de Staphylococcus aureus.
XP T 90-412. Juin 2006. Qualité de l’eau. Recherche et dénombrement des staphylocoques pathogènes. Méthode par
filtration sur membrane.
NF T 90-421. Août 2006. Essais des eaux. Examens bactériologiques des eaux de piscines.
NF T 90-461 (juillet 2001), NF T 90-461/A1 (juin 2005) et NF T 90-461/A2 (mai 2007). Qualité de l’eau. Contrôle qualité
des milieux de culture.
NF EN ISO 22718 (T 75-605). Septembre 2009. Cosmétiques. Microbiologie. Détection de Staphylococcus aureus.
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2010-01-12.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK030/F/2001-04 :8.
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