Macherey-Nagel NucleoMag Virus kit Mode d'emploi

MACHEREY-NAGEL
Biologie
moléculaire
Bioanalysis
Manuel
d’utilisation
User manual
Extraction d’ARN/ADN viral
n NucleoMag® Virus
Février 2024 / ​Rev. 12
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Extraction d'ARN/ADN viral
Sommaire
1 Composants
4
1.1 Contenu du kit
4
1.2 Matériel à fournir par l’utilisateur
5
1.3 A propos de ce manuel
5
2 Description du produit
6
2.1 Principe général
6
2.2 Caractéristiques du kit
6
2.3 Systèmes de séparation magnétique
7
2.4 Réglage des paramètres d’agitation
8
2.5 Manipulation des billes
9
2.6 Procédures d’élution
10
3 Conditions de stockage et préparation des réactifs
11
4 Instructions de sécurité
12
4.1 Elimination des déchets
12
5 Protocole pour l’extraction d’ARN / ​ADN viral à partir de fluides acellulaires
13
6 Annexes
17
6.1 Guide de résolution des problèmes
17
6.2 Informations de commande
18
6.3 Restrictions de l’utilisation du produit / ​garantie
19
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
3
Extraction d'ARN/ADN viral
1
Composants
1.1
Contenu du kit
NucleoMag® Virus
REF
1 × 96 preps
744800.1
4 × 96 preps
744800.4
NucleoMag® V-Beads
2 × 1.5 mL
12 mL
Tampon de lyse MVL
2 × 13 mL
125 mL
Tampon de fixation MV2
75 mL
300 mL
Tampon de lavage MV3
75 mL
300 mL
Tampon de lavage MV4
75 mL
300 mL
Tampon de lavage MV5
60 mL
250 mL
Tampon d’élution MV6
13 mL
60 mL
ARN Carrier*
400 µg
4 × 400 µg
Tampon ARN Carrier
500 µL
4 × 500 µL
Protéinase K (lyophilisée)*
20 mg
4 × 20 mg
Tampon de protéinase PB
1.8 mL
8 mL
1
1
Manuel d’utilisation
*Pour la préparation des solutions de travail et les conditions de stockage, voir le chapitre 3.
4
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
1.2
Matériel à fournir par l’utilisateur
Produit
Plaque de séparation pour la séparation des
billes magnétiques,
p.e., Square-well Block (bloc 96 puits avec des
puits carrés de 2.1 mL)
REF
Conditionnement
740481
740481.24
4
24
Tubes de lyse pour l’incubation des échantillons
et la lyse,
p.e., Rack of Tubes Strips (1 set comprend 1 Rack, 740477
12 barrettes de 8 bouchons chacune (puits de
740477.24
1,2 mL), et 12 Cap Strips)
Plaque d’élution pour la collecte d’acides
nucléiques purifiés,
p.e., plaque d’élution à fond en U (microplaque de
96 puits de 0,3 mL avec 300 µL de puits à fond en
U)
p.e., plaque d’élution à fond plat (microplaque de
96 puits de 0,3 mL avec 300 µL de puits à fond
plat)
740486.24
24
740673
20
Pour l’utilisation du kit sur l’instrument
KingFisher® Flex :
744950
96-well Accessory kit pour KingFisher® (Blocs
Square-well Blocks, Deep-well Tip Combs, Plaques
d'élution pour 4 × 96 NucleoMag® Virus preps pour
la plateforme KingFisher® 96/Flex).
1.3
4 sets
24 sets
1 set
A propos de ce manuel
Il est recommandé de lire attentivement les instructions de ce manuel d’utilisation avant
toute utilisation. Toute la documentation technique est également disponible sur Internet
à l’adresse suivante : www.mn-net.com.
Veuillez contacter le service technique pour obtenir des informations sur les modifications
apportées au présent manuel d’utilisation par rapport aux révisions précédentes ou mises
à jour.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
5
Extraction d'ARN/ADN viral
2
Description du produit
2.1
Principe général
Le kit NucleoMag® Virus est conçu pour l’extraction de l’ADN ou d'ARN viral à partir de
liquides acellulaires tels que le sérum, le plasma, la salive et les lavages d’écouvillons.
Ce kit fournit des réactifs et des billes magnétiques pour l’extraction de 96 échantillons à
partir de 200 µL de liquide acellulaire. La procédure est basée sur l’adsorption réversible
des acides nucléiques sur les billes paramagnétiques dans des conditions de tampons
appropriées. La lyse des échantillons est réalisée par incubation avec un nouveau tampon
de lyse MVL contenant des ions chaotropiques et une digestion à la protéinase K. Pour la
fixation des acides nucléiques sur les billes paramagnétiques, le tampon de fixation MV2 et
les billes NucleoMag® V-Beads sont ajoutés au lysat. Après la séparation magnétique, les
billes paramagnétiques sont lavées pour éliminer les contaminants et les sels à l’aide des
tampons de lavage MV3 et MV4. L’éthanol résiduel des étapes de lavage précédentes est
éliminé par une courte incubation des billes dans le tampon de lavage MV5. Enfin, l’ARN/
ADN viral hautement pur est élué avec le tampon d’élution MV6 à faible teneur en sel ou
avec de l’eau. L’ARN / ​ADN viral purifié peut être directement utilisé pour des applications
en aval. Il est recommandé d’utiliser des contrôles appropriés pour les applications en aval
(par exemple, des contrôles internes, des contrôles d’extraction, des contrôles positifs/
négatifs). Le kit NucleoMag® Virus peut être utilisé manuellement ou automatiquement
sur des robots pipeteurs ou des séparateurs magnétiques automatisés.Nous pouvons
fournir une assistance personnalisée, des informations sur les protocoles ou des
programmes vérifiés pour de nombreuses plateformes. Pour plus d’informations, veuillez
contacter notre support technique ou visiter le site www.mn-net.com/automation.
2.2
Caractéristiques du kit
NucleoMag® Virus est conçu pour la préparation rapide, manuelle et automatisée,
à petite échelle, d’ARN/ADN viral à partir de liquides acellulaires, tels que le sérum, le
plasma, la salive et les lavages d’écouvillons.
Le kit est conçu pour être utilisé avec le séparateur magnétique NucleoMag® SEP (voir
les informations de commande) ou d’autres systèmes de séparation magnétique (voir
le paragraphe 2.3). Les NucleoMag® V-Beads sont des billes superparamagnétiques
hautement réactives. La capacité de fixation théorique est d’environ 0,2 μg d’acide
nucléique pour 1 μL de suspension de NucleoMag® V-Beads. Le temps de préparation
manuel de 96 échantillons est d’environ 120 minutes. L’ARN / ​ADN purifié peut être utilisé
directement comme matrice pour la RT-PCR, la PCR ou tout type de réaction enzymatique.
NucleoMag® Virus permet une automatisation facile sur les instruments courants de
manipulation des liquides ou les séparateurs magnétiques automatisés. Le temps de
préparation réel dépend de la configuration de l’instrument et du système de séparation
magnétique utilisé. Typiquement, 96 échantillons peuvent être purifiés en moins de
120 minutes en utilisant le NucleoMag® SEP sur la plateforme d’automatisation.
Réserver à l’usage de la recherche
6
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
2.3
Systèmes de séparation magnétique
Pour l’utilisation du NucleoMag® Virus, il est recommandé d’utiliser le séparateur
magnétique NucleoMag® SEP. La séparation est effectuée dans un Square-well Blocks
(voir les informations de commande). Le kit peut également être utilisé avec d’autres
séparateurs courants.
Séparateur magnétique
®
Plaque ou tube de séparation
NucleoMag SEP (MN REF 744900)
Square-well Block (MN REF 740481)
Tecan Te-MagS™
Tubes de 1,5 mL sans couvercle (Sarstedt)
Séparation à aimants statiques
Les séparateurs à aimants statiques, par exemple, NucleoMag® SEP (pour une utilisation
manuelle et sur les stations de travail de manipulation des liquides) sont recommandés en
combinaison avec un agitateur de microplaques approprié pour une remise en suspension
optimale des billes pendant les étapes de lavage et d’élution. Alternativement, les billes
peuvent être remises en suspension dans le tampon par pipetages successifs. Pour
une utilisation entièrement automatisée sur les stations de travail de manipulation des
liquides, un bras manipulateur est nécessaire, la plaque est transférée vers le séparateur
magnétique pour la séparation des billes et transférée vers le module d’agitation pour la
remise en suspension des billes.
Systèmes magnétiques mobiles
Séparateurs à aimants mobiles : Les aimants / ​tiges magnétiques sont déplacés d’un côté
à l’autre du puits et vice versa. Les billes suivent ce mouvement et sont ainsi entraînées à
travers le tampon pendant les étapes de lavage et d’élution. La séparation a lieu lorsque
le système s’arrête.
Séparateurs automatisés
Les billes magnétiques sont transférées dans des plaques ou des tubes appropriés
grâce à des aimants mobiles. Les billes sont remises en suspension grâce aux aimants
recouverts de protection. Après la fixation, le lavage ou l’élution, les billes sont à nouveau
recueillies grâce aux aimants recouverts de protection et transférées dans la plaque ou le
tube suivant.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
7
Extraction d'ARN/ADN viral
2.4
Réglage des paramètres d’agitation
Lors de l’utilisation d’un agitateur de plaques pour les étapes de lavage et d’élution,
les réglages de vitesse doivent être soigneusement ajustés pour chaque plaque de
séparation spécifique et chaque agitateur afin d’éviter toute contamination croisée d’un
puits à l’autre. Procéder comme suit :
Réglage de la vitesse de l’agitateur pour les étapes de fixation et de lavage :
•
Déposer 1000 µL (pour vérifier les paramètres de l’étape de fixation) ou 600 µL
(pour vérifier les paramètres de l’étape de lavage) d’eau colorée dans les puits de
la plaque de séparation. Placer la plaque sur l’agitateur et commencer à agiter
avec une vitesse modérée pendant 30 secondes. Éteindre l’agitateur et vérifier la
présence de petites gouttelettes d’eau colorée à la surface de la plaque.
•
Augmenter la vitesse, agiter pendant 30 secondes supplémentaires et vérifier à
nouveau la présence de gouttelettes à la surface de la plaque.
•
Continuez à augmenter la vitesse jusqu’à ce que vous observiez des gouttelettes
sur le dessus de la plaque de séparation. Réduisez le réglage de la vitesse, vérifiez à
nouveau et utilisez ce réglage pour l’étape de lavage.
Réglage de la vitesse de l’agitateur pour l’étape d’élution :
•
Introduire 100 µL d’eau colorée dans les puits de la plaque de collecte et procéder
comme décrit ci-dessus.
8
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
2.5
Manipulation des billes
Distribution des billes
Une distribution homogène des billes magnétiques dans les différents puits de la plaque
de séparation est essentielle pour assurer une grande cohérence d’un puits à l’autre. Par
conséquent, avant de distribuer les billes, s’assurer que les billes sont complètement
remises en suspension. Bien agiter le flacon de stockage ou le placer brièvement sur un
vortex. Le fait de mélanger au préalable les billes magnétiques avec le tampon de fixation
permet une distribution plus homogène des billes dans les différents puits de la plaque
de séparation. Lors de l’automatisation, il est recommandé de procéder à une étape
de prémélange avant d’aspirer le mélange billes / ​tampon de fixation du réservoir afin de
maintenir les billes remises en suspension.
Durée de séparation magnétique
L’attraction des billes magnétiques sur les aimants dépend de la force magnétique des
aimants, de la plaque de séparation choisie, de la distance entre la plaque de séparation
et les aimants et du volume à traiter. Les temps d’aimantation des billes doivent être
vérifiés et ajustés sur chaque système. Il est recommandé d’utiliser les plaques ou tubes
de séparation spécifiés par le fournisseur du séparateur magnétique.
Lavage des billes
Le lavage des billes peut être réalisé par agitation ou par pipetage. Contrairement au
mélange par pipetages successifs, l’agitation permet de mélanger simultanément tous
les échantillons. Cela permet de réduire le temps et le nombre de cônes nécessaires à
la préparation. La remise en suspension par pipetages successifs est cependant plus
efficace que l’agitation par plaque ou l’agitation magnétique.
Efficacité de
la remise en
suspension
Vitesse
Nombre de cônes
nécessaires
Mélange
magnétique
+
++
Faible
Agitateur
++
++
Faible
Pipetage
+++
+*
Haut
Méthode
* Dispositif de pipetage à 8 canaux
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
9
Extraction d'ARN/ADN viral
2.6
Procédures d’élution
L’ARN / ​
ADN viral purifié peut être élué directement avec le tampon d’élution MV6
fourni. L’élution peut être effectuée dans un volume ≥ 50 µL. Il est essentiel de recouvrir
complètement les NucleoMag® V Beads avec le tampon d’élution pendant l’étape
d’élution. Le volume de tampon d’élution distribué dépend du système de séparation
magnétique (p.e., la position du culot à l’intérieur de la plaque de séparation). Pour une
élution efficace, le culot de billes magnétiques doit être entièrement remis en suspension
dans le tampon d’élution. Pour certains séparateurs, des volumes d’élution élevés peuvent
être nécessaires pour couvrir la totalité du culot.
10
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
3
Conditions de stockage et préparation des
réactifs
Attention : Les tampons MVL, MV2 et MV3 contiennent du sel chaotropique ! Porter des
gants et des lunettes !
•
Tous les composants du kit NucleoMag®Virus doivent être conservés à une
température comprise entre 15 et 25 °C et sont stables jusqu’à un an.
•
Tous les tampons sont livrés prêts à l’emploi.
•
Tampon de lyse MVL :
Le tampon de lyse MVL peut former des précipités de sel lors du stockage. Pour
redissoudre le précipité de sel, incuber le flacon de tampon à 40 °C jusqu’à ce que
tout le précipité soit redissous.
Tampon de lyse MVL avec ARN Carrier : Le tampon de lyse MVL additionné d’ARN
Carrier peut être conservé à température ambiante pendant 1 à 2 semaines.
Un réchauffement fréquent, des températures > 80 °C et une incubation prolongée à
la chaleur entraînent une dégradation d'ARN Carrier. Cela conduit à une récupération
réduite d'ARN viral et éventuellement à des résultats de RT-PCR faussement négatifs, en
particulier si des échantillons de faible titre sont utilisés. Ne pas réchauffer le tampon MVL
contenant l’ARN Carrier plus de 6 fois !
Avant de débuter une procédure NucleoMag® Virus, préparez les éléments suivants :
•
Protéinase K : Avant la première utilisation du kit, ajouter 1,1 mL de tampon
de protéinase PB à chaque flacon de protéinase K lyophilisée. La solution de
protéinase K dissoute doit être conservée en aliquotes à - 20 °C jusqu’à 6 mois.
•
ARN Carrier : Avant la première utilisation du kit, ajouter 440 µL de tampon ARN
Carrier à chaque flacon d’ ARN Carrier lyophilisé. Conserver la solution d’ARN
Carrier dissoute en aliquotes à - 20 °C jusqu’à 6 mois.
Note : En raison de la procédure de production et de la faible quantité d’ARN Carrier
contenue dans le flacon, l’ARN Carrier peut être à peine visible.
NucleoMag® Virus
1 × 96 preps
744800.1
4 × 96 preps
744800.4
Protéinase K (lyophilisée)
1 flacon (20 mg)
Ajouter 1,1 mL de
tampon protéinase
4 flacons (20 mg/flacon)
Ajouter 1,1 mL de tampon
protéinase à chaque flacon
ARN Carrier (lyophilisé)
1 flacon (400 µg)
Ajouter 440 µL de
tampon ARN Carrier
4 flacons (400 µg/flacon)
Ajouter 440 µL de tampon
ARN Carrier à chaque flacon
REF
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
11
Extraction d'ARN/ADN viral
4
Instructions de sécurité
Lorsque vous travaillez avec le kit NucleoMag® Virus, porter des vêtements de protection
appropriés (p.e. une blouse de laboratoire, des gants jetables et des lunettes de protection).
Pour plus d’informations, consultez les fiches de données de sécurité appropriées (les
FDS sont disponibles en ligne sur www.mn‑net.com/msds).
Attention : Le chlorhydrate de guanidine dans le tampon MVL, le perchlorate de sodium
dans les tampons MV2 et MV3 et le thiocyanate de guanidinium dans le tampon ARN
Carrier peuvent former des composés très réactifs lorsqu’ils sont combinés avec de
l’eau de Javel ! Par conséquent, n’ajoutez pas d’eau de Javel ou de solutions acides
directement aux déchets de préparation d’échantillons.
Les déchets générés par le kit NucleoMag® Virus n’ont pas été testés pour détecter
la présence de matériel infectieux résiduel. Une contamination des déchets liquides par
du matériel infectieux résiduel est hautement improbable en raison du tampon de lyse
fortement dénaturant et du traitement à la protéinase K, mais elle ne peut être totalement
exclue. Par conséquent, les déchets liquides doivent être considérés comme infectieux et
doivent être manipulés et éliminés conformément aux règlementations de sécurité locales.
4.1
Elimination des déchets
Eliminer les substances dangereuses, potentiellement infectieuses ou contaminées par du
matériel biologique de manière sure et conforme aux dispositions règlementaires locales.
12
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
NucleoMag® Virus
5
Protocole pour l’extraction d’ARN / ​ADN viral à
partir de fluides acellulaires
Résumé du protocolev
•
Pour les exigences en matière de matériel, voir le paragraphe 2.3.
•
Pour des informations détaillées sur chaque étape, voir page 15.
Avant de débuter la procédure :
•
1
Vérifier si la protéinase K et l’ARN Carrier ont été préparés conformément au
paragraphe 3.
Lyse de l’échantillon
10 µL de protéinase K
200 µL d’échantillon
4 µL d’ARN Carrier
200 µL de MVL
Mélanger
56 °C, 10 min
2
Fixation d'ARN / ​
ADN viral aux billes
NucleoMag® V-Beads
30 µL de V-Beads
600 µL de MV2
Mélanger en agitant
pendant 5 min à TA.
(Optionnel : mélanger par
pipetages successifs
Retirer le surnageant
après 2 min de séparation.
3
Lavage avec le tampon
MV3
Retirer le Square-well Blocks
du NucleoMag® SEP
500 µL MV3
Remettre en suspension :
Agiter 1 min à TA
Retirer le surnageant
après 2 min de séparation.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
13
NucleoMag® Virus
4
Lavage avec le tampon
MV4
Retirer le Square-well Blocks
du NucleoMag® SEP
500 µL MV4
Remettre en suspension :
Agiter 1 min à TA
Retirer le surnageant
après 2 min de séparation.
5
Lavage avec le tampon
MV5
550 µL MV5
Incuber pendant 45 – 60 s
Note : Ne pas remettre les billes
en suspension dans le tampon
MV5 !
Retirer le surnageant
6
Elution d’ARN /ADN
Retirer le Square-well
Blocks du NucleoMag® SEP
50 – 100 µL MV6
Agiter 5 min à 56 °C
(Optionnel : mélanger par
pipetages successifs)
Séparer 2 min et transférer
l’ARN / ​ADN viral dans la
plaque / ​les tubes d’élution.
14
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
NucleoMag® Virus
Protocole détaillé
Ce protocole est conçu pour les séparateurs magnétiques à aimants statiques (par
exemple, NucleoMag® SEP) et les agitateurs de plaques adaptés. Il est recommandé
d’utiliser un Square-well Blocks pour la séparation (voir le paragraphe 6.2, informations de
commande). L’extraction d'ARN/ADN viral peut également être réalisée dans des tubes
de réaction avec des séparateurs magnétiques appropriés. Ce protocole est destiné à une
utilisation manuelle et sert de guide pour l’adaptation du kit aux instruments robotisés.
1
Lyse de l’échantillon
Prédispenser 10 µL de protéinase K et 200 µL d’échantillon dans un tube de
réaction approprié. Ajouter 200 µL de tampon MVL (avec l’ARN Carrier ajouté) au
tube de réaction (si l’ARN Carrier n’est pas mélangé au préalable avec le tampon
MVL, ajouter 4 µL de la solution mère au tube de réaction). Bien mélanger par
pipetages successifs et incuber à 56 °C pendant 10 min. L’étape de lyse peut
également être réalisée dans des barrettes de tubes (voir le paragraphe 6.2,
informations de commande).
Pour plus de commodité, un mélange préalable de protéinase K, de tampon
MVL et d’ARN Carrier peut être préparé. Ce mélange préalable doit être ajouté à
l’échantillon immédiatement (dans les 15 min suivant la préparation).
Après l’incubation de la lyse, centrifuger pour recueillir tout échantillon des
couvercles des tubes de lyse et transférer chaque lysat dans les puits d’un
Square-well Block.
2
Fixation d'ARN/ADN viral aux billes magnétiques
Ajouter 30 µL de V-Beads remises en suspension et 600 µL de tampon MV2
à l’échantillon lysé.
Mélanger par pipetages successifs 6 fois et agiter pendant 5 min à température
ambiante. Alternativement, lors de la procédure du kit sans agitateur, pipeter de
haut en bas 10 fois et incuber pendant 5 min à température ambiante.
Les billes NucleoMag®V-Beads et le tampon MV2 peuvent être mélangés
préalablement.
Veiller à remettre en suspension les NucleoMag® V-Beads avant de les retirer du
flacon de stockage. Vortexer brièvement le flacon de stockage jusqu’à ce qu’une
suspension homogène soit formée.
Séparer les billes magnétiques contre la paroi des puits en plaçant le Squarewell Block sur le NucleoMag® SEP un séparateur magnétique. Attendre au moins
2 min jusqu’à ce que toutes les billes aient été attirées par les aimants. Retirer et
jeter le surnageant à l’aide d’une pipette.
Ne pas perturber les billes attirées lors de l’aspiration du surnageant.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
15
NucleoMag® Virus
3
Lavage avec le tampon MV3
Retirer le Square-well Block du séparateur magnétique NucleoMag® SEP.
Ajouter 500 µL de tampon MV3 et remettre les billes en suspension en agitant
jusqu’à ce que les billes soient complètement remises en suspension (1 – 3 min).
Alternativement, remettre les billes en suspension complètement par pipetages
successifs.
Séparer les billes magnétiques en plaçant le Square-well Block sur le séparateur
magnétique NucleoMag® SEP. Attendre au moins 2 min jusqu’à ce que toutes les
billes aient été attirées par l’aimant. Retirer et jeter le surnageant à l’aide d’une
pipette.
4
Lavage avec le tampon MV4
Retirer le Square-well Block du séparateur magnétique NucleoMag® SEP.
Ajouter 500 µL de tampon MV4 et remettre les billes en suspension en agitant
jusqu’à ce que les billes soient complètement remises en suspension (1 – 3 min).
Alternativement, remettre les billes en suspension complètement par pipetages
successifs successifs.
Séparer les billes magnétiques en plaçant le Square-well Block sur le séparateur
magnétique NucleoMag® SEP. Attendre au moins 2 min jusqu’à ce que toutes les
billes aient été attirées par l’aimant. Retirer et jeter le surnageant à l’aide d’une
pipette.
5
Lavage avec le tampon MV5
Laisser le Square-well Block sur le séparateur magnétique NucleoMag® SEP.
Ajouter délicatement 550 µL de tampon MV5 dans chaque puits et incuber
pendant 45 – 60 sec tant que les billes sont encore attirées par les aimants.
Aspirer et jeter le surnageant.
Ne pas remettre en suspension les billes dans le tampon MV5. Cette étape permet
d’éliminer les traces d’éthanol et élimine une étape de séchage. Ne pas dépasser
le temps d’incubation de max. 1 min.
6
Elution
Ajouter le volume désiré de tampon MV6 (50 – 100 µL) à chaque puits du Squarewell Block et remettre les billes en suspension en agitant pendant 5 min à 56 °C.
Alternativement, remettre les billes en suspension complètement par pipetages
successifs et incuber pendant 5 min à 56 °C.
Séparer les billes magnétiques en plaçant le Square-well Block sur le séparateur
magnétique NucleoMag® SEP. Attendre au moins 2 min jusqu’à ce que toutes les
billes soient attirées par les aimants. Transférer le surnageant contenant l’ARN / ​
ADN viral purifié dans des microtubes ou des barrettes de tubes (voir paragraphe
6.2, informations de commande).
16
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
6
Annexes
6.1
Guide de résolution des problèmes
Problème
Causes possibles et suggestions
Volume de tampon d’élution insuffisant
•
Le culot des billes doit être entièrement recouvert de tampon
d’élution.
Performance insuffisante du tampon d’élution pendant l’étape d’élution
•
Faible
rendement / ​
faible
sensibilité
Éliminer complètement les tampons résiduels lors des étapes de
séparation. Les tampons résiduels diminuent l’efficacité des étapes
de lavage et d’élution suivantes.
Séchage excessif des billes
•
Ne pas laisser les billes sécher, car cela pourrait entraîner une
baisse de l’efficacité de l’élution.
Aspiration d’une partie des billes présents sur l’aimant
•
Ne pas perturber les billes attirées lors de l’aspiration du
surnageant, en particulier lorsque le culot de billes magnétiques
n’est pas visible dans le lysat.
Aspiration et perte de billes
•
Durée de séparation magnétique trop courte ou vitesse
d’aspiration trop élevée.
Procédure de lavage insuffisante
Pureté
insuffisante / ​
faible
sensibilité
•
Utiliser uniquement les combinaisons appropriées de séparateur et
de plaque, par exemple, Square-well Blocks en combinaison avec
NucleoMag® SEP.
•
S’assurer que les billes sont remises en suspension complètement
pendant la procédure de lavage. Si l’agitation n’est pas suffisante
pour remettre les billes en suspension complètement, mélanger en
effectuant des pipetages successifs.
Elimination de l’éthanol des tampons de lavage
Faible
performance
d'ARN
dans les
applications
en aval
•
Veillez à éliminer toute la solution de lavage éthanolique tampon
MV4, car l’éthanol résiduel interfère avec les applications en aval.
Évaporation de l’éthanol des tampons de lavage
•
Fermer hermétiquement les flacons de tampons, éviter
l’évaporation de l’éthanol des flacons de tampons ainsi que des
tampons remplis dans les réservoirs. Ne pas réutiliser les tampons
des réservoirs de tampons.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
17
Extraction d'ARN/ADN viral
Problème
Causes possibles et suggestions
Durée de séparation magnétique trop courte
•
Perte des
billes
Vitesse d’aspiration trop élevée (étape d’élution)
•
6.2
Augmenter la durée de séparation pour permettre aux billes d’être
complètement attirées par les aimants avant d’aspirer tout liquide
du puits.
Une vitesse d’aspiration élevée pendant l’étape d’élution peut
entraîner une perte des billes. Réduire la vitesse d’aspiration pour
l’étape d’élution.
Informations de commande
Produit
REF
Conditionnement
NucleoMag® Virus
744800.1
744800.4
1 × 96 preps
4 × 96 preps
NucleoMag® SEP
744900
1
Square-well Blocks
740481
740481.24
4
24
Film PE auto-adhésif
740676
50 feuilles
Rack of Tubes Strips
740477
740477.24
4 sets
24 sets
744950
1 set
Plaques 96 Deep-Well pour les systèmes à
barreaux magnétiques
744955
25
Tip Combs 8-Well pour les systèmes à barreaux
magnétiques
744960
50
Kit accessoires 8-Well pour les systèmes à
barreaux magnétiques (5 x 96 Deep-Well, 10 x Tips
Combs 8-Well)
744961
1 Set
(set composé de 1 Rack, 12 barrettes de 8 tubes
chacune et 12 barrettes de 8 bouchons)
96-well Accessory Kit A for KingFisher
(set composé de Square-well Blocks, Deep-well
Tip Combs, Elution Plates pour 4 × 96 NucleoMag®
Virus preps utilisant la plateforme King Fisher® Flex)
Visitez le site www.mn-net.com pour obtenir des informations plus détaillées sur le
produit.
18
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
Extraction d'ARN/ADN viral
6.3
Restrictions de l’utilisation du produit / ​garantie
Tous les produits MACHEREY-NAGEL sont conçus uniquement pour l’usage auquel ils
sont destinés. Ils ne sont pas destinés à être utilisés pour un autre usage. La description
de l’usage prévu des produits est disponible dans les notices originales des produits
MACHEREY-NAGEL. Avant d’utiliser nos produits, veuillez lire attentivement le mode
d’emploi et les consignes de sécurité figurant dans la Fiche de Données de Sécurité du
produit.
Ce produit MACHEREY-NAGEL comporte une documentation énonçant les spécifications
et d’autres informations techniques. MACHEREY-NAGEL garantit la conformité du
produit aux spécifications déclarées. La garantie fournie est limitée aux spécifications
et descriptions des données indiquées dans la documentation originale MACHEREYNAGEL.
Aucune autre déclaration, verbale ou écrite, par des employés, agents ou représentants
de MACHEREY-NAGEL n’est autorisée, à l’exception des déclarations écrites signées par
un représentant dûment habilité de MACHEREY-NAGEL. Le client ne doit pas s’y fier et
elles ne font pas partie d’un contrat de vente ou de la présente garantie.
La responsabilité pour tous les dommages éventuels survenant en lien avec nos produits
est limitée au strict minimum, comme indiqué dans les conditions générales de vente
de MACHEREY-NAGEL, dans leur dernière version, disponibles sur le site internet de la
société. MACHEREY-NAGEL n’assume aucune autre garantie.
Les produits et leur application sont susceptibles de modifications. Par conséquent,
veuillez contacter notre Equipe Service Technique pour obtenir les informations les plus
récentes sur les produits MACHEREY-NAGEL. Vous pouvez également contacter votre
revendeur local pour obtenir des informations scientifiques à caractère général. Les
descriptions figurant dans la documentation MACHEREY-NAGEL sont fournies à titre
d’information uniquement.
Dernière mise à jour : 08/2022, Rev. 04
Veuillez contacter:
MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG
Tel.: +49 24 21 969 333
support@mn-net.com
Marques déposées :
KingFisher est une marque déposée de Thermo Fisher Scientific
NucleoMag® est une marque déposée de MACHEREY-NAGEL GmbH & Co KG
Te-MagS est une marque déposée de Tecan Group Ltd, Suisse.
Tous les noms et dénominations utilisés peuvent être des marques, des marques déposées ou des marques
enregistrées par leurs propriétaires respectifs, même s’ils ne sont pas des dénominations spéciales. La mention
deproduits et de marques n’est qu’une information (c’est-à-dire qu’elle ne porte pas atteinte aux marques et aux
marques déposées et ne peut être considérée comme une recommandation ou une évaluation). En ce qui concerne
ces produits ou services, nous ne pouvons accorder aucune garantie quant à leur sélection, leur efficacité ou leur
fonctionnement.
MACHEREY-NAGEL – 02/2024, Rev. 12
19
Plasmid DNA
Clean up
RNA
DNA
Viral RNA and DNA
Protein
High throughput
Accessories
Auxiliary tools
A037275/xxxx
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