Auxilab epi-fluorescence Manuel utilisateur
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epi-fluorescence epi fluoresc microscope epi-fluorescence microscope Certaines substances dés qu’ils sont excitées avec de la lumière de certain longueur d’onde, possèdent-elles la capacité d’émettre à nouveau de la lumière d’une longueur d’onde plus grande que celle-là, étant donné son structure chimique. Ce propriété s’appelle fluorescence et elle concerne à certaines molécules tel que collagène, élastine, lignine ou chlorophylle et d’une série de composants chimiques, les fluorochromes (FITC, DAPI, TRITC) avec des nombreuses et différentes applications; à souligner ces deux techniques de rutine dans des laboratoires d’investigation et diagnostic dans lesquelles il est indispensable l’utilisation du microscope de fluorescence : Immunofluorescence (IF): il consiste à la détection et marquage de certaines molécules d’intérêt dans de biopsies ou coupes histologiques avec l’utilisation d’anticorps spécifiques conjugués avec certain fluorochrome ce qui permet le diagnostic de certaines maladies. Hybridation in situ avec fluorescence (FISH): il consiste à l’hybridation de certains parties de DNA avec ce qui sont les sondes marquées avec fluorochrome, ce qui permet la détection de mutations et altérations génétiques en facilitant le diagnostic prénatale et la détection et diagnostic de certaines tumeurs Fondements théoriques epi-fluorescence microscope théoriques fondements Lente ocularie La epi-fluorescence ou fluorescence de lumière reflétée consiste à l’incidence d’un faisceau de lumière de certaine longueur d’onde sur l’échantillon à voir. Cet échantillon absorbe l’énergie de la lumière incidente et émet à nouveau de la lumière à une longueur Filtre de barriere vert d’onde supérieure à celle-là. Pour permettre ce phénomène il est nécessaire l’utilisation d’un système de filtres (cubes) avec les suivants composants : Filtre de barriere bleu Filtre d’excitation (EX): il sélectionne la longueur d’onde de la lumière incidente. Miroir dichroïque (DM): Il reflète la lumière de certaines longueurs d’onde tandis qu’il laisse passer la lumière de longueurs d’onde supérieures. De cette façon-là il Miroir reflète la lumière d’excitation pour que celle-ci arrive à l’échantillon tandis qu’il laisse dichronique passer la lumière émise par les substances fluorescentes Filtre d’émission ou barrière (BA): il sélecte la longueur d’onde fluorescente émise light source par le fluorochrome et permet qu’il arrive aux oculaires. Au suivant graphique on montre un schème du fonctionnement du microscope d’epifluorescence. La lumière arrivée de la source (lampe de mercure), elle traverse d’abord un filtre dont-il sélectionne la longueur d’onde capable d’exciter le fluore chrome. Cette lente objective lumière est reflétée par le moyen d’un miroir dichroïque et ensuite tombe sur l’échantillon, en excitant le fluorochrome de façon que ceci émet des photons d’une longueur d’onde supérieure à celle d’incidence. Cette lumière émise par l’échantillon traverse échantillon (fluorescenc vert, exatée avec bleu) le miroir dichroïque et arrive jusqu’à un seconde filtre dont-il selecte la longueur d’onde de émission du fluorochrome, en permettant son arrivée aux oculaires. longueur d’onde bleu longueur d’onde vert epi-fluorescence microscope tableau de filtres Position tourelle Filtre excitation(EX) Filtre émission (BA) Miroir dichroïque (DM) Fluore chrome applicable V (verde) 510-560 590 575 TRITC Phycoérythrine Bromure d’éthidium B (azul) 450-490 520 505 FITC GFP Cy2 BV (azul/violeta) 400-440 470 455 Orange acridine Jaune acridine Alexa fluor 488 V (violeta) 380-420 450 430 --- U (ultravioleta) 330-380 420 400 DAPI Alexa fluor 350 4 Diaphragmes de champ et aperture pour control et ajustement de l’illumination incidente. epi-fluorescence microscope 5 9 Embout avec inclination réglable de 0-40º Palanque pour le blocage de l’incidence du faisceau de lumière sur l’échantillon; Il permet l’observation de l’échantillon au moyen de la lumière transmise et sans aucune besoin d’éteindre la lampe de mercure et ainsi éviter une sur exposition qui pourrait endommager l’échantillon 1 Lampe de haute pression de mercure de 100 W pour fluorescence au moyen de lumière reflétée ; elle est logée dans un compartiment à part et elle dispose de vis pour la centrer. 3 Tourelle avec des différents positions interchangeables pour sélectionner le cube de filtre d’excitation et émission de la longueur d’onde plus adéquate selon le fluorochrome utilisé (Voir Tableau de filtres) 7 Lampe halogène 12 V, 50 W avec réglage d’intensité logée en compartiment à part et avec des vis pour la centrer. 10 Objectifs plan achromatiques avec optique corrigée à l’infini, spécialement conçus pour des applications de fluorescence. 2 6 Système Köehler pour illumination transmise avec diaphragme de champ et ouverture et condensateur type Abbe avec lente coulissante du chemin optique 8 Haute stabilité de l’équipement étant donné sa vaste et solide base. Source d’alimentation de la lampe de mercure avec temporisateur d’heures d’usage epi-fluorescence microscope caractéristiques techniques Référence 50158358 Embout Trioculaire, inclination reglable0-40º; ajustement de distance interpupilar (50-75 mm) et correction dioptrique Optique Corrigé à l’infini Oculaires WF10x/20 Barillet Séxtuple Objectifs Plan apochromatiques de fluorescence 4x, A.N.: 0.15 10x, A.N.: 0.35 40x (R), A.N.: 0.75 100x (R), A.N.: 0.90 Platine Mécanique de double platine(180x160 mm); déplacement (80x50 mm) Condensateur Abbe (AN: 1.25), avec lente condensateur coulissante Illumination Type Köehler avec diaphragme de champ et ouverture Source lumière Epi-fluorescence Lampe de haute pression de mercure 220V, 100W Transmis Lampe halogène 12V, 50W epi-fluorescence microscope caractéristiques objectifs tableau Objectif 4x 10x 40x 100x Ouverture numérique 0.15 0.35 0.75 0.90 Long. tube mécanique ∞ ∞ ∞ ∞ Grosseur couvre 0.17 0.17 0.17 0.17 Couleur réf. Rouge Jaune Bleu Blanc Système Sec Sec Sec Sec Distance travail 21.6 2.9 0.6 0.62 Diamètre champ vision 6 2.4 0.60 0.24 Résolution 2.24 0.96 0.45 0.37 Polígono Morea Norte Calle D Nº 6 Beriain [Navarra] C.P. 31191 Tel: +34 948 310 513 www.auxilab.es ">

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