epi-fluorescence
epi
fluoresc
microscope
epi-fluorescence microscope
Certaines substances dés qu’ils sont excitées avec de la lumière de certain longueur d’onde, possèdent-elles la capacité d’émettre
à nouveau de la lumière d’une longueur d’onde plus grande que celle-là, étant donné son structure chimique. Ce propriété s’appelle fluorescence et elle concerne à certaines molécules tel que collagène, élastine, lignine ou chlorophylle et d’une série de
composants chimiques, les fluorochromes (FITC, DAPI, TRITC) avec des nombreuses et différentes applications; à souligner ces
deux techniques de rutine dans des laboratoires d’investigation et diagnostic dans lesquelles il est indispensable l’utilisation du
microscope de fluorescence :
Immunofluorescence (IF): il consiste à la détection et marquage de certaines molécules d’intérêt dans de biopsies ou coupes histologiques avec l’utilisation d’anticorps spécifiques conjugués avec certain fluorochrome ce qui permet le diagnostic de certaines maladies.
Hybridation in situ avec fluorescence (FISH): il consiste à l’hybridation de certains parties de DNA avec ce qui sont les sondes marquées avec fluorochrome, ce qui permet la détection de mutations et altérations génétiques en facilitant le diagnostic prénatale et la détection et diagnostic de certaines tumeurs
Fondements théoriques
epi-fluorescence microscope
théoriques
fondements
Lente ocularie
La epi-fluorescence ou fluorescence de lumière reflétée consiste à l’incidence d’un faisceau de lumière de certaine longueur d’onde sur l’échantillon à voir. Cet échantillon absorbe l’énergie de la lumière incidente et émet à nouveau de la lumière à une longueur
Filtre de barriere vert
d’onde supérieure à celle-là.
Pour permettre ce phénomène il est nécessaire l’utilisation d’un système de filtres
(cubes) avec les suivants composants :
Filtre de barriere bleu
Filtre d’excitation (EX): il sélectionne la longueur d’onde de la lumière incidente.
Miroir dichroïque (DM): Il reflète la lumière de certaines longueurs d’onde tandis qu’il laisse passer la lumière de longueurs d’onde supérieures. De cette façon-là il
Miroir
reflète la lumière d’excitation pour que celle-ci arrive à l’échantillon tandis qu’il laisse
dichronique
passer la lumière émise par les substances fluorescentes
Filtre d’émission ou barrière (BA): il sélecte la longueur d’onde fluorescente émise
light source
par le fluorochrome et permet qu’il arrive aux oculaires.
Au suivant graphique on montre un schème du fonctionnement du microscope d’epifluorescence. La lumière arrivée de la source (lampe de mercure), elle traverse d’abord
un filtre dont-il sélectionne la longueur d’onde capable d’exciter le fluore chrome. Cette
lente
objective
lumière est reflétée par le moyen d’un miroir dichroïque et ensuite tombe sur l’échantillon, en excitant le fluorochrome de façon que ceci émet des photons d’une longueur
d’onde supérieure à celle d’incidence. Cette lumière émise par l’échantillon traverse
échantillon (fluorescenc vert, exatée avec bleu)
le miroir dichroïque et arrive jusqu’à un seconde filtre dont-il selecte la longueur d’onde
de émission du fluorochrome, en permettant son arrivée aux oculaires.
longueur d’onde bleu
longueur d’onde vert
epi-fluorescence microscope
tableau
de filtres
Position tourelle
Filtre excitation(EX)
Filtre émission (BA)
Miroir dichroïque (DM)
Fluore chrome applicable
V (verde)
510-560
590
575
TRITC
Phycoérythrine
Bromure d’éthidium
B (azul)
450-490
520
505
FITC
GFP
Cy2
BV (azul/violeta)
400-440
470
455
Orange acridine
Jaune acridine
Alexa fluor 488
V (violeta)
380-420
450
430
---
U (ultravioleta)
330-380
420
400
DAPI
Alexa fluor 350
4
Diaphragmes de champ et aperture pour control et ajustement de l’illumination incidente.
epi-fluorescence microscope
5
9
Embout avec inclination réglable
de 0-40º
Palanque pour le blocage de l’incidence du faisceau de lumière sur l’échantillon; Il permet l’observation de l’échantillon au moyen de la lumière transmise et sans aucune besoin d’éteindre la lampe de mercure et ainsi éviter une sur exposition qui pourrait
endommager l’échantillon
1
Lampe de haute pression de mercure de 100 W pour fluorescence au moyen de lumière reflétée ; elle est logée dans
un compartiment à part et elle dispose de vis pour la centrer.
3
Tourelle avec des différents positions interchangeables pour sélectionner le cube de filtre d’excitation et émission de la longueur d’onde plus
adéquate selon le fluorochrome utilisé (Voir Tableau de filtres)
7
Lampe halogène 12 V, 50 W avec réglage d’intensité logée
en compartiment à part et avec des vis pour la centrer.
10
Objectifs plan achromatiques avec optique
corrigée à l’infini, spécialement conçus pour
des applications de fluorescence.
2
6
Système Köehler pour illumination transmise avec
diaphragme de champ et ouverture et condensateur type
Abbe avec lente coulissante du chemin optique
8
Haute stabilité de l’équipement étant donné sa
vaste et solide base.
Source d’alimentation de la lampe de mercure avec temporisateur d’heures d’usage
epi-fluorescence microscope
caractéristiques
techniques
Référence
50158358
Embout
Trioculaire, inclination reglable0-40º; ajustement de distance interpupilar (50-75 mm) et correction dioptrique
Optique
Corrigé à l’infini
Oculaires
WF10x/20
Barillet
Séxtuple
Objectifs
Plan apochromatiques de fluorescence
4x, A.N.: 0.15
10x, A.N.: 0.35
40x (R), A.N.: 0.75
100x (R), A.N.: 0.90
Platine
Mécanique de double platine(180x160 mm); déplacement (80x50 mm)
Condensateur
Abbe (AN: 1.25), avec lente condensateur coulissante
Illumination
Type Köehler avec diaphragme de champ et ouverture
Source lumière
Epi-fluorescence
Lampe de haute pression de mercure 220V, 100W
Transmis
Lampe halogène 12V, 50W
epi-fluorescence microscope
caractéristiques
objectifs
tableau
Objectif
4x
10x
40x
100x
Ouverture numérique
0.15
0.35
0.75
0.90
Long. tube mécanique
∞
∞
∞
∞
Grosseur couvre
0.17
0.17
0.17
0.17
Couleur réf.
Rouge
Jaune
Bleu
Blanc
Système
Sec
Sec
Sec
Sec
Distance travail
21.6
2.9
0.6
0.62
Diamètre champ vision
6
2.4
0.60
0.24
Résolution
2.24
0.96
0.45
0.37
Polígono Morea Norte
Calle D Nº 6 Beriain [Navarra]
C.P. 31191
Tel: +34 948 310 513
www.auxilab.es
">
