Roche VENTANA PD-L1 (SP263) Assay, Universal, CE IVD, Predictive, NSCLC Manuel utilisateur

VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining
of Non-Small Cell Lung Cancer
Guide d’interprétation
2 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Table des matières
Introduction5
Utilisation prévue
Notice d’utilisation du produit
Objectif du Guide d’interprétation
6
6
6
Évaluation7
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration des cellules tumorales
7
Profils de coloration des cellules immunitaires
10
Exigences concernant les tissus
Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond
14
14
Tissu de contrôle positif
15
Critères de notation
Tableau de notation PD-L1
16
16
Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage 17
Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC
Galerie de photos
18
18
Cas difficiles
32
Influence des conditions préanalytiques sur la coloration
par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Stabilité des lames
49
49
50
50
Références51
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 3
4 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Introduction
Le cancer du poumon, ou cancer bronchique, est le cancer le plus
fréquent dans le monde depuis plusieurs décennies et demeure la
cause majeure de mortalité liée au cancer dans le monde. On estime
qu’il représente 12.9 % de tous les nouveaux cas de cancer et qu’il est
responsable de près de 1.59 million de décès chaque année dans le
monde, soit environ un décès sur cinq liés au cancer.1 Bien que des
progrès aient été faits en matière de diagnostic et de traitement, le
pronostic demeure mauvais avec de faibles taux de survie à long terme,
quel que soit le stade. Au cours des trois dernières décennies, le cancer
du poumon a connu l’une des plus faibles améliorations du taux de
survie parmi l’ensemble des cancers.2
Le cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC), l’un des deux
principaux types de cancer du poumon, représente près de 85 % de
tous les cas de cancer du poumon.3 Chez près de la moitié des patients
dont le NSCLC a été nouvellement diagnostiqué, la maladie a déjà
métastasé, réduisant ainsi nettement la probabilité de survie. Le taux de
survie relatif à 5 ans chez les patients diagnostiqués comme présentant
un NSCLC avec présence de métastases est de 4.7 %.3 La majorité des
patients atteints de NSCLC présentent une maladie inopérable de stade
localement avancé (stade IIIB) ou une maladie métastatique (stade IV),
pour laquelle il n’existe actuellement aucun traitement curatif. En
moyenne, ces patients meurent dans l’année qui suit le diagnostic.
L’amélioration des résultats cliniques du cancer du poumon pourra
certainement être possible grâce à une meilleure compréhension des
événements moléculaires à la base de sa pathogenèse, en identifiant
de nouveaux biomarqueurs cibles et en développant de nouvelles
options de traitement.
d’antigène peut entraîner une diminution des réponses immunitaires,
y compris l’inhibition de l’activation des lymphocytes T et la production
des cytokines6. L’expression de PD-L1 sur les cellules immunitaires
et tumorales a été observée7,8. L’expression aberrante de PD-L1 sur
les cellules tumorales semblerait entraver l’immunité antitumorale,
résultant en une évasion immunitaire5,8. L’interruption de la voie PD-L1/
PD-1 représente donc une stratégie intéressante pour redynamiser
l’immunité des lymphocytes T spécifiques de la tumeur supprimée
par l’expression de PD-L1 dans le microenvironnement tumoral. La
PD-L1 est exprimée dans un grand nombre de cancers, dont le cancer
des poumons, le mélanome, le cancer urothélial, le cancer de l’ovaire
et le cancer colorectal. La prévalence de l’expression de la PD-L1 est
comprise entre 12 et 100 % en fonction du type de tumeur, du clone
anti PD-L1 et du seuil de positivité.9
Le VENTANA PD-L1 (SP263) Assay utilise un anticorps primaire
monoclonal de lapin produit contre PD-L1 (ligand 1 de mort cellulaire
programmée) homologue B7 1 (B7-H1, CD274). Il reconnaît une
glycoprotéine transmembranaire d’un poids moléculaire de 45 à 55 kDa.
L’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a été développé par Spring
BioScience. Ce produit est un anticorps prédilué destiné à être utilisé
sur des instruments BenchMark IHC/ISH avec le kit de détection
OptiView DAB IHC Detection Kit, et utilise le Guide d’interprétation du
test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour le cancer du poumon non à
petites cellules.
Le PD-L1 est une protéine transmembranaire qui diminue les réponses
immunitaires en se liant à deux de ses récepteurs inhibiteurs, PD-1
et B7-1 (CD80)4. PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur les
lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation
perdurant en état de stimulation chronique comme dans les cas
d’infection chronique ou de cancer5. La liaison de PD-L1 et de
PD-1 empêche la prolifération des lymphocytes T, la production
des cytokines et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation
fonctionnelle ou l’épuisement des lymphocytes T. CD80 est une
molécule exprimée sur les cellules présentatrices d’antigène et
sur les lymphocytes T activés. La liaison de la protéine PD-L1 et du
récepteur CD80 sur les lymphocytes T et les cellules présentatrices
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 5
Utilisation prévue
Notice d’utilisation du produit
Consulter la notice appropriée de VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
pour une description détaillée de l’utilisation prévue pour ce produit.
Remarque : l’utilisation de ce diagnostic avec les traitements
indiqués peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consulter
votre représentant Roche pour obtenir les approbations locales.
Objectif du Guide d’interprétation
Le présent guide a pour objectif de fournir aux pathologistes un outil
facilitant l’évaluation clinique de coupes de tissu de NSCLC fixées au
formol et incluses en paraffine (FFPE) colorées avec VENTANA PD-L1
(SP263) Assay en utilisant le VENTANA PD-L1 (SP263) Scoring Algorithm,
conformément à la notice du produit. Plus précisément, ce guide :
•
Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et
l’intensité de coloration pouvant résulter de la coloration des tissus
de NSCLC avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
•
Donne des exemples de cas difficiles à déterminer.
•
Présente d’autres contrôles susceptibles d’être utilisés avec le test
mais qui ne sont pas fournis par Ventana.
6 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Évaluation
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration
des cellules tumorales
Les cellules néoplasiques de NSCLC marquées avec le test VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay sont évaluées afin de déterminer le pourcentage
de positivité des cellules tumorales avec coloration membranaire, quelle
que soit l’intensité du signal DAB (diaminobenzidine). La coloration
immunohistochimique des tissus de NSCLC est membranaire et/
ou cytoplasmique, et peut être exprimée de manière homogène ou
hétérogène dans tout le néoplasme. La coloration membranaire peut
être discontinue, périphérique ou basolatérale.
La coloration cytoplasmique est généralement diffuse bien que
certains cas soient finement granulaires. De rares cas ont présenté une
coloration punctiforme périnucléaire d’intensité variable. Le pourcentage
total d’intensités de signal provenant de la membrane tumorale est
estimé visuellement et utilisé pour déterminer le niveau d’expression de
la PD-L1. La coloration cytoplasmique des cellules tumorales n’est pas
prise en compte pour la détermination de l’expression de la PD-L1. Un
anticorps de contrôle négatif correspondant à l’isotype est utilisé pour
évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons testés
et établir une intensité de coloration de référence.
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Divers profils de coloration membranaire et cytoplasmique dans les cellules tumorales (20X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 7
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules tumorales avec coloration membranaire de type basolatéral (20X)
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cas inhabituel de coloration punctiforme périnucléaire au sein des cellules tumorales (40X)
8 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Dans les cas présentant un profil globalement basolatéral de coloration membranaire des
cellules tumorales, seules les cellules avec une expression cellulaire tumorale certaine (la flèche rouge indique les cellules tumorales avec
coloration membranaire latérale) doivent être incluses dans l’estimation du pourcentage. Les zones où la coloration peut être attribuée à des
cellules immunitaires, à des éléments du stroma ou à la membrane basale, et non avec certitude à une coloration tumorale ne doivent pas être
prises en compte (la flèche bleue désigne la coloration sous les cellules tumorales sans coloration latérale) (20X).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 9
Profils de coloration des cellules immunitaires
Les cellules immunitaires présentent toute une gamme d’intensités
de coloration : négative, cytoplasmique diffuse faible ou signal
membranaire faible à fort. Une coloration punctiforme peut être
observée en association avec des lymphocytes. L’expression de la
PD-L1 a été constatée dans des lymphocytes, des macrophages, des
histiocytes, des cellules plasmatiques et des neutrophiles. Des images
représentatives des cellules immunitaires colorées avec le test VENTANA
PD-L1 (SP263) Assay sont fournies ci-dessous pour référence afin
d’aider le pathologiste à différencier la coloration des cellules tumorales
de celle des cellules immunitaires. Lors de la détermination du niveau
d’expression de la PD-L1, la coloration des cellules immunitaires
n’est pas prise en compte. REMARQUE : Les cellules immunitaires ne
constituent pas un contrôle interne positif fiable.
NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec macrophages alvéolaires
(flèche) (20X)
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration positive des
macrophages alvéolaires (flèche) avec tumeur négative à la PD-L1
adjacente, 0 % de coloration (20X)
NSCLC, H&E : Cellules tumorales avec cellules immunitaires
lymphocytaires et plasmatiques (20X)
NSCLC, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration punctiforme
des cellules immunitaires (flèche bleue) et diffuse (flèche noire) avec
tumeur négative à la PD-L1 adjacente, 0 % de coloration (20X)
10 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Avec un grossissement de 4X (images du haut), il semble que le profil de coloration soit une
coloration de la membrane tumorale significative. L’examen avec un grossissement supérieur (20X, en bas) révèle que la tumeur est globalement
négative à la PD-L1, avec une coloration des cellules immunitaires membranaire (flèche noire) et punctiforme (flèche bleue). Une coloration des
cellules dendritiques est également observée (flèche rouge).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 11
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Cellules plasmatiques avec coloration cytoplasmique faible diffuse à modérée. Les cellules
tumorales adjacentes ne présentent pas de coloration (20X).
12 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
NSCLC, H&E et VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Les neutrophiles colorés à l’aide de H&E expriment la PD-L1 (flèche bleue). Le cas présente
également une coloration membranaire des cellules tumorales modérée (flèche noire) (40X).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 13
Exigences concernant les tissus
Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay nécessite une coupe de
tissu en série pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une
deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps
de contrôle négatif et une troisième coupe de tissu en série pour la
coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. En outre, le
tissu placentaire humain sain à terme peut être utilisé comme contrôle
pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Ce tissu présente une
coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration
uniforme faible à forte du cytoplasme dans les cellules de la lignée
trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire
peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond. Si
l’évaluation H&E indique que l’échantillon patient n’est pas adéquat, un
nouvel échantillon doit être prélevé. La coloration d’un échantillon doit
être répétée sur des lames non colorées si (1) la lame de contrôle du
tissu ne présente pas de coloration acceptable ; (2) la lame de contrôle
négatif ne présente pas de coloration acceptable ; ou (3) la lame à
tester (la lame d’IHC PD-L1) colorée à l’aide du test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne
peut pas être interprétée en raison d’artéfacts, d’artéfacts de bordure,
d’une nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors
la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les contrôles
sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay peut être évaluée, la lame peut être évaluée par un
pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères de notation.
Critères d’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond
L’acceptabilité de la morphologie et de la coloration de fond des tissus peut être évaluée pour chaque cas de patient en utilisant les critères décrits
dans les Tableaux 1 et 2.
Tableau 1 : Critères d’acceptabilité de la morphologie
Interprétation
Observation au microscope
Acceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt sont visualisés, ce qui permet une interprétation de la coloration.
Inacceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont pas visualisés, ce qui compromet l’interprétation de la coloration.
Tableau 2 : Critères d’acceptabilité de la coloration de fond
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration non spécifique non intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique.
Inacceptable
Coloration non spécifique intrusive à l’interprétation de la coloration spécifique.
14 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Tissu de contrôle positif
Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière que
les échantillons de patients, doit être testé pour chaque ensemble de
conditions de test et lors de chaque procédure de coloration réalisée
avec le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay. Le tissu de contrôle (un
cas indice) doit être un prélèvement récent d’autopsie, de biopsie ou
de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique
aux tissus de patients. Ces tissus peuvent être utilisés pour contrôler
toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une
coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut
être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non
pour la fixation ou préparation des tissus. Un cas de NSCLC positif avec
coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui
présente une coloration forte, car il pourra être utilisé pour détecter
des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes
hors spécifications pouvant être liés à l’instrument. La coloration
positive de la membrane des cellules néoplasiques dans le tissu de
contrôle sert à confirmer que l’anticorps VENTANA PD-L1 (SP263) a
été appliqué et que l’instrument fonctionne correctement. Le tissu de
contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances
et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de
patients. De plus, le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay peut utiliser
le placenta humain à terme comme contrôle positif, qui présente une
coloration uniforme modérée à forte de la membrane et une coloration
uniforme faible à forte du cytoplasme dans les cellules de la lignée
trophoblastique. Les vaisseaux et le tissu du stroma placentaire
peuvent être utilisés pour évaluer toute coloration de fond.
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Coloration
membranaire uniforme forte et coloration cytoplasmique
modérée des cellules de la lignée trophoblastique (10X)
Placenta, VENTANA PD-L1 (SP263) Assay : Stroma et vaisseaux
des villosités ne présentant aucune coloration PD-L1 (20X)
Tableau 3 : Critères d’évaluation du tissu placentaire de contrôle pour le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Interprétation
Description de la coloration
Acceptable
Coloration uniforme modérée à forte de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique,
et
coloration du stroma placentaire et des vaisseaux.
Inacceptable
Coloration uniforme inexistante à faible de la membrane des cellules de la lignée trophoblastique
et/ou
coloration spécifique dans le tissu du stroma placentaire et le tissu vasculaire.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 15
Critères de notation
Un pathologiste qualifié attribue le score d’IHC pour la PD-L1 en
fonction de son évaluation de la fréquence de la coloration IHC
membranaire PD-L1 spécifique dans les cellules tumorales. Un niveau
d’expression est attribué aux cas comme décrit dans le Tableau de
notation PD-L1.
Les cas ne pouvant être évalués incluent notamment les cas présentant
une quantité de tumeur viable insuffisante, une coloration de fond
ou une décalcification. Les cas de NSCLC présentant une quantité
suffisante de cellules tumorales viables (comme déterminée par le
pathologiste chargé de la notation) et sans coloration de fond sur la
lame IHC PD-L1 sont acceptables pour l’évaluation.
Des images des divers profils de coloration et d’expression sont
fournies dans les pages qui suivent.
Tableau de notation PD-L1
Tableau 4 : Notation PD-L1
Évaluer et dénombrer le pourcentage de cellules tumorales dont la membrane est positive à PD-L1, quelle que soit l’intensité au-delà de la coloration de fond, tel que
noté sur le contrôle isotype négatif correspondant. Le niveau d’expression de la PD-L1 est indiqué sous forme de nombre entier.
16 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Évaluation de la coloration membranaire en pourcentage
La galerie d’images qui suit montre un spectre quantitatif de coloration
membranaire des cellules tumorales sur un éventail d’échantillons
de NSCLC contenant des cellules tumorales viables, à des fins
d’illustration uniquement. Les niveaux d’expression de 0 à 100 % des
cellules tumorales avec coloration membranaire ont été représentés
à titre d’exemple afin d’aider le pathologiste à évaluer la coloration
PD-L1. La détermination de la quantité suffisante d’échantillon est
laissée à la discrétion du pathologiste.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 17
Atlas d’expression de la PD-L1 dans le NSCLC
Galerie de photos
La coloration se caractérise par la présence de tout signal détectable
au-delà de la coloration de fond, tel que noté sur le contrôle isotype
négatif correspondant par la coloration membranaire des cellules
néoplasiques. Cet atlas d’expression contient des exemples des
niveaux d’expression dans divers champs visuels. La légère coloration
membranaire des cellules tumorales n’est pas facile à discerner à faible
grossissement et peut nécessiter un examen patient et méthodique de
la lame colorée à un grossissement plus élevé, notamment dans les cas
où elle s’accompagne d’une coloration cytoplasmique faible.
Jeu de photos 1. Coloration négative des cellules tumorales et immunitaires (0 %) (20X)
Pour les cas présentant une expression de la PD-L1 située en bas
du spectre, toute coloration membranaire des histiocytes ou des
macrophages alvéolaires doit être identifiée afin de ne pas l’interpréter
par erreur comme une coloration des cellules tumorales. Se référer
à la lame H&E peut aider à différencier les cellules tumorales des
cellules immunitaires. La différence entre l’expression de la PD-L1
inférieure à 1 % et de 1 % étant très mince, la numération des cellules
18 (soit en comptant le nombre total de cellules tumorales présentant une
coloration membranaire et en le comparant au nombre total de cellules
tumorales viables, soit en comptant les groupes de cellules tumorales
dont la membrane est colorée et en le ramenant à l’intégralité de
la tumeur viable) peut aider le pathologiste à mieux distinguer ces
niveaux d’expression si proches.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 2. Moins de 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses présentant une
coloration membranaire, cytoplasmique et punctiforme (flèches noires) (10X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 19
Jeu de photos 3. Tumeur comportant 1 % de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Macrophages alvéolaires épars
avec coloration membranaire faible présents dans les lumières (flèches noires) (10X)
20 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 4. Tumeur comportant 3% de cellules tumorales avec coloration membranaire (cercles bleus). Cellules immunitaires éparses
présentant une coloration principalement punctiforme (flèches et cercles noirs) (10X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 21
Jeu de photos 5. Tumeur comportant 5 % de cellules avec coloration membranaire entourées en bleu. La zone tumorale (comportant la tumeur
viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient des zones focales avec des cellules immunitaires montrant l’expression de la
PD-L1 (4X)
22 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 6. Tumeur comportant 10 % de cellules avec coloration membranaire légère à modérée (entourées en bleu) dans ce champ visuel.
Cellules immunitaires éparses présentant également une expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 23
Jeu de photos 7. Tumeur comportant 15 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu). Une coloration des cellules
immunitaires associées à la tumeur est également observée (2X)
24 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 8. Tumeur comportant 20 % de cellules avec coloration membranaire légère (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (10X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 25
Jeu de photos 9. Tumeur comportant 25 % de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone tumorale
contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose peuvent présenter une coloration
et ne doivent pas être prises en compte (entourées en vert) (4X)
26 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 10. Tumeur comportant 35% de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient quelques cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir) (4X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 27
Jeu de photos 11. Tumeur comportant 50% de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale (comportant la tumeur viable, une desmoplasie adjacente et une inflammation) contient quelques cellules immunitaires avec expression
de la PD-L1 (entourées en noir). Les zones de nécrose colorées sont entourées en vert et ne doivent pas être prises en compte (4X)
28 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Les cas présentant plus de 50 % de cellules tumorales avec coloration
membranaire peuvent être estimés de manière plus précise et plus
reproductible en évaluant le pourcentage de cellules tumorales sans
coloration membranaire puis en le soustrayant à 100 % afin d’obtenir le
niveau d’expression de PD-L1 final.
Jeu de photos 12. Tumeur comportant 70% de cellules avec coloration membranaire (entourées en bleu) dans ce champ visuel. La zone
tumorale contient des cellules immunitaires avec expression de la PD-L1 (entourées en noir). La coloration des zones de nécrose ne doit pas être
prise en compte (entourées en vert) (4X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 29
Jeu de photos 13. Tumeur comportant 80% de cellules avec coloration membranaire dans ce champ visuel. Une estimation des cellules
tumorales sans coloration membranaire (entourées en rouge) suivie d’une soustraction à 100 % pour obtenir le pourcentage final de cellules
tumorales avec coloration membranaire peut donner des résultats plus précis et reproductibles (10X)
30 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Jeu de photos 14. Coloration de la membrane des cellules tumorales à 100 % (4X)
Jeu de photos 15. Coloration de la membrane des cellules tumorales positive (100 %) sans coloration de cellules immunitaires associées à la
tumeur (20X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 31
Cas difficiles
Divers profils de coloration et caractéristiques morphologiques
peuvent rendre difficiles l’interprétation et la quantification de la
coloration membranaire de la tumeur.
•
Lorsqu’une répartition hétérogène de l’expression est observée,
l’estimation du pourcentage total de coloration membranaire
des cellules tumorales peut s’avérer difficile. Une approche
systématique peut être utile : la tumeur est divisée en quantités
plus faibles mais égales de tumeur viable qui sont ensuite
évaluées pour déterminer le pourcentage de cellules tumorales
avec membrane, puis la moyenne est calculée.
Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des
facteurs suivants :
•
Coloration cytoplasmique faible
Certains échantillons peuvent présenter une faible coloration
cytoplasmique des cellules tumorales qui peut être confondue,
à faible grossissement, avec une faible coloration membranaire
des cellules tumorales. Pour cette raison, lors de l’évaluation
des lames colorées à l’aide du test VENTANA PD-L1 (SP263)
Assay, une coloration faible doit être confirmée par l’examen
à un grossissement supérieur afin de distinguer la coloration
membranaire de la coloration cytoplasmique dans les cellules
tumorales.
•
Chevauchement d’une forte coloration des cellules
immunitaires et de la coloration des cellules
tumorales
Certaines tumeurs peuvent contenir un élément hautement
inflammatoire à la fois autour de la tumeur et infiltrant celle-ci.
Dans certains cas, lorsqu’une coloration forte est observée à la
fois pour les cellules tumorales et les cellules immunitaires, il
peut s’avérer difficile de différencier et de quantifier le niveau
d’expression de la PD-L1 pour les cellules tumorales. La présence
de cellules immunitaires infiltrant la tumeur doit être confirmée
à l’aide d’une lame H&E. Le profil de coloration de la PD-L1 ainsi
que les caractéristiques nucléaires des cellules sont utilisés
pour attribuer l’expression aux cellules immunitaires (coloration
punctiforme) et aux cellules tumorales (coloration membranaire
linéaire).
•
Matériel endogène et exogène
Il arrive que du matériel endogène et/ou exogène soit
présent dans les échantillons de NSCLC, comme du pigment
anthracosique, de la mélanine ou de l’hémosidérine, et qu’il
obscurcisse et gêne l’interprétation de la coloration par le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay des cellules tumorales et
immunitaires. La comparaison de la lame de contrôle isotype
négatif avec la lame colorée de PD-L1 peut permettre de
différencier la coloration des biomarqueurs du matériel endogène
ou exogène. Dans les tumeurs de NSCLC présentant une
formation de kératine significative, une réponse histiocytaire sous
la forme de cellules géantes de corps étranger peut être observée.
Une telle réponse immunitaire peut avoir l’apparence d’une
coloration de cellules tumorales avec une coloration membranaire
des cellules géantes.
32 Hétérogénéité
•
Type d’échantillons cytologiques par aspiration à
l’aiguille fine (FNA)
Les échantillons de blocs cellulaires FFPE FNA présentent des
difficultés particulières dans l’interprétation du PD-L1 SP263.
Comme les cellules tumorales FNA peuvent être réparties sur
une large zone de la lame, le risque de négligence des cellules
tumorales à coloration positive ou négative augmente, ce qui
conduirait à une évaluation inexacte du pourcentage de TC
positif. Les blocs de cellules FNA présentent en général une
cellularité inférieure aux échantillons de biopsie et de résection.
Par conséquent, des inexactitudes dans l’estimation de la forme
des cellules à coloration positive peuvent entraîner de grandes
différences dans le pourcentage de positivité. Pour cette raison,
il est recommandé d’examiner soigneusement les lames à H&E
et IHC pour s’assurer que l’anatomopathologiste connaît toute la
zone de la tumeur.
Les échantillons de blocs de cellules FNA ne présentent pas la
structure ou les repères caractéristiques des échantillons de
biopsie et de résection. Par conséquent, il faut se baser sur la
morphologie cellulaire pour déterminer si la cellule colorée est
non tumorale (lymphocytes, granulocytes ou macrophages) ou
tumorale. Analyser avec précaution les morphologies des cellules
non tumorales et tumorales sur la lame à H&E et appliquer les
déductions de cet examen visuel aux populations cellulaires de
la lame colorée à l’aide de VENTANA PD-L1 (SP263) Assay pour
réduire/éliminer les erreurs d’identification des cellules.
La détermination de la coloration cytoplasmique par rapport à la
coloration membranaire peut être particulièrement difficile dans
les échantillons par FNA. Une résolution de grossissement élevé
peut être nécessaire pour déterminer la localisation spécifique
(membrane ou cytoplasme) du signal DAB.
Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages
suivantes.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 1. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC, avec une coloration cytoplasmique faible (flèche noire) et une
coloration membranaire faible (flèche verte) de la cellule tumorale. L’examen à un grossissement supérieur est nécessaire pour différencier la
coloration cytoplasmique faible de la coloration membranaire faible. Une coloration des macrophages alvéolaires est également observée (flèche
rouge). Dans ce champ visuel, 10 % des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 33
Cas difficile 2. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC avec une coloration membranaire faible de la tumeur (flèche
noire). De nombreuses cellules tumorales s’accompagnent d’un blush cytoplasmique. Dans ce champ visuel, 90% des cellules tumorales
présentent une coloration membranaire (20X)
34 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 3. La tumeur montre des cellules présentant à la fois une coloration cytoplasmique faible et une coloration membranaire faible
(flèche noire) et seulement une coloration membranaire faible (flèche bleue). Dans ce champ visuel, 90% des cellules tumorales présentent une
coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 35
Cas difficile 4. Comparaison d’une coloration membranaire et d’une coloration cytoplasmique dans un échantillon de blocs de cellules FNA.
Cette image présente un rougissement cytoplasmique diffus (flèche bleue), une faible coloration membranaire des cellules tumorales (flèche
rouge) et une rare coloration modérée de la membrane des cellules tumorales (flèche noire). Comme pour les résections et les biopsies, le
rougissement cytoplasmique diffus dans les échantillons par FNA peut être difficile à différencier de la coloration membranaire (20x).
36 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 5. Distinction des macrophages (flèches bleues) des cellules tumorales (flèche noire) dans un échantillon par FNA. La morphologie
cellulaire, le rapport nucléaire-cytoplasmique et la taille des cellules peuvent être utilisés pour différencier la coloration des macrophages de la
coloration des TC. Ce cas présente également un rougissement cytoplasmique dans certaines cellules tumorales (flèche rouge), ce qui ne compte
pas dans l’estimation du pourcentage des TC (10x).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 37
Cas difficile 6. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une inflammation incluse significative. La coloration
membranaire des cellules immunitaires (flèche noire) et la coloration punctiforme des cellules immunitaires (flèche bleue) sont enchevêtrées avec
les cellules tumorales présentant une coloration membranaire linéaire partielle (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 40 % des cellules tumorales
présentent une coloration membranaire. La tumeur très enflammée est observée sur la lame H&E (40X)
38 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 7. Coloration membranaire des cellules tumorales (flèche noire) entremêlée avec une coloration des cellules immunitaires diffuse
(flèche bleue) et punctiforme (flèche rouge). Dans ce champ visuel, 100% des cellules tumorales présentent une coloration membranaire (20X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 39
Cas difficile 8. Coloration ponctuée des cellules immunitaires intratumorales dans un échantillon par FNA. Les cellules immunitaires
intratumorales représentées ici présentent un motif de coloration ponctué (flèches bleues). Ce cas présente également une contre-coloration
pâle, qui pourrait compliquer l’identification des cellules sur la lame (10x).
40 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 9. Image à fort agrandissement illustrant une coloration ponctuée des cellules immunitaires intratumorales dans un échantillon par
FNA. Les cellules immunitaires intratumorales illustrées ici présentent un motif de coloration ponctué (flèches bleues ; 20x).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 41
Cas difficile 10. Le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay a coloré le cas de NSCLC présentant une anthracose (flèche noire) et une réaction à
cellules géantes de corps étranger (flèche rouge) non associée à l’interprétation du cas (en haut, 20X). Une zone différente du cas contient du
pigment anthracosique (flèche noire) chevauchant une coloration punctiforme de cellules immunitaires (flèche verte) ainsi qu’une coloration
membranaire des cellules tumorales (en bas, flèche bleue). Dans ce champ visuel, 80 % des cellules tumorales présentent une coloration
membranaire (en bas, 20X)
42 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 11. Coloration membranaire des cellules tumorales dans un échantillon par FNA. Coloration membranaire partielle (flèche rouge)
et totale (flèche noire). Ces deux caractéristiques sont prises en compte dans la détermination du pourcentage des TC. Bien que la coloration de la
zone nécrotique de cet échantillon soit faible (flèches bleues), les zones nécrotiques présentent souvent un signal DAB non spécifique et créent
des difficultés d’interprétation. Les lecteurs doivent utiliser l’histomorphologie pour déterminer si les cellules évaluées sont des cellules tumorales
ou nécrotiques viables (20x).
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 43
Cas difficile 12. Coloration membranaire des cellules tumorales et immunitaires dans un échantillon par FNA. Cette image représente une
coloration membranaire partielle (flèche rouge) et totale (flèche noire). Ces deux caractéristiques sont prises en compte dans la détermination
du pourcentage des TC. Une cellule immunitaire présente également une coloration membranaire (flèche bleue) et se distingue par sa dimension
nettement inférieure à celle des cellules tumorales (20x).
44 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
50%
90%
35%
25%
Cas difficile 13. Les cellules tumorales avec coloration membranaire sont réparties de manière hétérogène dans l’intégralité de l’échantillon
(entourées en bleu). La division d’une tumeur entière en coupes plus petites comportant des quantités égales de tumeur viable permet d’effectuer
une estimation plus précise. Le pourcentage de cellules tumorales avec coloration membranaire dans chaque coupe est estimé et la moyenne
des coupes est calculée pour déterminer le niveau d’expression global de la PD-L1. La coloration des zones de nécrose ne doit pas être prise
en compte. Dans cet exemple, la moyenne des pourcentages de cellules tumorales viables avec expression membranaire provenant de chaque
quadrant donne un niveau d’expression global de la PD-L1 de 50 % (0.6X)
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 45
Cas difficile 14. Tumeur rare dans un échantillon diffus d’un échantillon par FNA. Un examen minutieux des échantillons par FNA est nécessaire
pour garantir la reconnaissance de toutes les cellules tumorales présentes. Peu de cellules tumorales présentant une coloration membranaire
spécifique du PD-L1 peuvent affecter la désignation de l’état IHC.
46 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Cas difficile 15. Tumeur rare dans un échantillon diffus d’un échantillon par FNA. Dans cet échantillon, un petit nombre de cellules tumorales
présentent une coloration membranaire (A, flèches noires). Un rougissement cytoplasmique est également présent (B, flèche bleue). Ce cas présente
un certain nombre de caractéristiques complexes, notamment une légère contre-coloration, une propagation diffuse des cellules tumorales et des
différences au niveau des cellules présentes sur les lames colorées par H&E et IHC. Le résultat de ce cas montre une coloration de 1 % TC.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 47
Cas difficile 16. Propagation diffuse des cellules tumorales dans un échantillon par FNA. Les échantillons par FNA présentent souvent une faible
cellularité par rapport aux échantillons de biopsie. Dans cet exemple, les grappes de cellules tumorales sont réparties de manière diffuse sur un
fond hématique (flèches noires). Certaines grappes de TC se trouvent en dehors du fond hématique (flèches rouges). Il est important de réaliser le
scan à faible et à fort grossissement sur toute la lame pour s’assurer que toutes les cellules tumorales sont observées.
48 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
Influence des conditions préanalytiques sur la coloration par le test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay
Recommandations de fixation pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1
(SP263) Assay
Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %. Les fixateurs acceptables et les temps de fixation sont
encadrés en bleu.
Coloration du tissu placentaire par le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay selon les fixateurs et les temps de fixation
Fixateur
Heure
temporelle
(heures)
NBF à 10 %
Formol zinc
Fixateur PREFER**
AFA**
Formol alcool**
Éthanol à 95 %**
1*
6
12
24
48
72
REMARQUES
*Un temps de fixation d’une heure est recommandé pour tous les
types de fixateurs.
**L’utilisation du fixateur PREFER et d’éthanol à 95 % (coloration plus
faible) ou de fixateurs à base d’alcool (coloration de fond élevée)
n’est pas recommandée. Voir les images supplémentaires à un
grossissement supérieur sur la droite.
Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer 49
Influence de l’épaisseur des tissus sur la coloration par
le test VENTANA PD-L1 (SP263) Assay
Ventana recommande une épaisseur de tissu de 4 à 5 μm avec le test
VENTANA PD-L1 (SP263) Assay.
Stabilité des lames
Des coupes d’environ 4 à 5 μm d’épaisseur doivent être prélevées et
montées sur des lames chargées positivement. Les lames doivent être
colorées dès que possible après la coupe ; toutefois, des études sur la
stabilité des lames conservées entre 2 et 8 °C et 30 °C ont démontré
que la coloration est adéquate dans les 12 mois suivant la préparation
pour les tissus et dans les 2 mois pour les blocs de cellules FNA.
50 Guide d’interprétation du VENTANA PD-L1 (SP263) Assay Staining of Non-Small Cell Lung Cancer
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2020-04-06
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