Introduction
Pour effectuer une analyse de séquençage sur le système MiniSeq, préparez des consommables d’analyse, puis suivez les invites du logiciel pour configurer l’analyse.
Présentation du flux de travail
Génération d’amplifiats
Lors de la génération d’amplifiats, les molécules d’ADN uniques sont liées à la surface de la Flow Cell, puis subissent une amplification de façon à former des amplifiats.
Séquençage
L’imagerie des amplifiats est réalisée par chimie de séquençage à deux canaux et combinaison de filtres propres à chacun des terminateurs de chaîne marqués par fluorescence. Lorsque l’imagerie d’une plaque sur la Flow Cell est terminée, le système passe à la plaque suivante. Ce processus se répète pour chaque cycle de séquençage. Après l’analyse des images, le logiciel réalise la définition des bases, le filtrage et la notation de la qualité.
Analyse
Pendant la progression de l’analyse, le logiciel de commande transfère automatiquement les fichiers de définition des bases (BCL) vers l’emplacement de sortie indiqué pour l’analyse des données. Plusieurs méthodes d’analyse existent en fonction de votre application et de la configuration d’analyse sélectionnée pour votre système. Pour obtenir plus de renseignements, consultez la section
Configurer les paramètres d’analyse à la page 17
.
Durée de l’analyse de séquençage
La durée de l’analyse de séquençage dépend du nombre de cycles réalisés. La longueur maximale d’une analyse est une analyse à lecture appariée de 150 cycles, plus jusqu’à deux lectures d’index de huit cycles chacune.
Pour connaître les durées attendues et les autres spécifications du système, consultez la page des spécifications du système MiniSeq sur le site Web d’Illumina.
Nombre de cycles dʼune lecture
Au cours d’une analyse de séquençage, une lecture comprend un cycle de plus que le nombre de cycles analysés. Par exemple, pour réaliser une analyse à lecture appariée de
150 cycles, la configuration de l’analyse doit prévoir 151 cycles par lecture (2 × 151), soit
302 cycles au total. À la fin de lʼanalyse, 2 × 150 cycles sont analysés. Le cycle supplémentaire de chaque lecture sert aux calculs de mise en phase et de mise en préphase.
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Support nº 20002370
Document nº 1000000002695 v00 FRA
