E. coli O157 Latex Test
FR
DR0620M...................100 Tests
1.
E. coli O157 - Test au Latex
Test d’agglutination au latex pour l’identification d’E. coli O157.
Certaines souches d’Escherichia coli ont été impliquées dans des
cas de colit hémorragique et de syndrome urémique hémolytique.
Ces souches produisent des véro-cytotoxines. Le sérotype d’E.
coli, reconnu comme le plus fréquemment responsable de cette
pathologie est le, sérotype O157:H7.
L’isolement de ce sérotype à partir d’une selle diarrhéique
et hémorragique est le signe d’une souche produisant une
vérocytotoxine1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.
Le test Oxoid met en évidence par agglutination de particules
de latex sur lame les souches d’E. coli possédant l’antigène
O157. Il est préférable d’utiliser parallèlement à ce test la gélose
Mac Conkey au sorbitol (Oxoid CM0813). Les souches d’E. coli
O157:H7 ne fermentent pas le sorbitol et donnent donc des
colonies incolores sur ce milieu, contrairement à !a majorité des
autres souches d’E. coli qui fermentent le sorbitol et donnent des
colonies roses caractéristiques.
La gélose Mac Conkey au sorbitol permet une première
orientation. Les colonies qui ne fermentent pas le sorbitol
peuvent alors être testées avec le réactif au latex pour confirmer
leur appartenance au sérogroupe O157 et donc leur aptitude a
produire une véro-cytotoxine.
2.
Réactifs
DR 621M latex test
Particules de latex bleues sensibilisées par des
anticorps de lapin dirigés contre l’antigène
somatique O157. 100 tests.
DR 622M latex de contrôle
Particules de latex bleues sensibilisées par des
immunoglobulines de lapin non spécifiques.
100 tests.
DR 623M contrôle positif
Suspension d’E. coli O157 inactivé. 25 tests
DR 624M contrôle négatif
Suspension d’E. coli O116 inactivé. 25 tests
DR 500G cartes tests
35 cartes jetables
3.
Matériel nécessaire, non fourni
oese.
solution saline à 0,85%.
solution désinfectante - solution d’hypochlorite de sodium
> 1,3% p/p.
4.
Précautions
Exclusivement pour usage in vitro.
Ne pas congeler.
Ne pas mélanger les réactifs appartenant à des lots différents.
réactifs contiennent de l’azide de sodium à 0,1%. Celui-ci peut
réagir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre et donner des
composés potentiellement explosifs. Pour éviter l’accumulation
dans les canalisations, rincer abondamment, immédiatement
après élimination du réactif.
négatif et indique l’absence de E. coli O157.
Légende des symboles
Les résultats ne peuvent pas être interprétés en cas d’agglutination
du latex de contrôle.
_________________________________________
5.
Conservation
Les réactifs doivent, être conservés à 2-8°C jusqu’a la date de
péremption indiquée sur le coffret.
Certaines souches d’E. coli s’émulsionnent difficilement dans la
solution saline et peuvent donc donner une réaction filamenteuse
avec le latex test et le latex de contrôle. Ce type de réaction n’est
pas une véritable agglutination et ne doit pas être pris en compte.
6.
Contrôles
Les suspensions de contrôle doivent être utilisées une fois par jour,
avant d’effectuer les tests, pour vérifier le bon fonctionnement
des réactifs au latex.
Le contrôle positif doit donner une agglutination bien visible avec
le latex test en moins d’une minute.
Le contrôle négatif ne doit pas présenter d’agglutination en une
minute.
Si le contrôle est incorrect, ne pas utiliser le réactif.
7.
Remarques
Ne pas toucher l’échantillon avec le compte-gouttes de façon à ne
pas contaminer les latex.
Revisser correctement les bouchons après usage pour éviter
l’évaporation ou la contamination des réactifs.
Remettre le coffret au réfrigérateur après usage et veiller à ce que
les flacons restent en position verticale.
8.
Culture
Les colonies à tester peuvent être prélevées soit sur une gélose
Mac Conkey au sorbitol - Oxoid CM0813 (colonies incolores),
soit sur un milieu non sélectif. Il est nécessaire de tester environ
10 colonies différentes pour augmenter la probabilité de détecter
une souche d’E coli O157 qui peut se trouver en culture mixte
avec d’autres sérotypes. L’utilisation du latex de contrôle permet
de s’assurer que la souche n’est pas autoagglutinable.
9.
1.
Mode opératoire
Ramener les réactifs au latex à température ambiante.
Bien mélanger les suspensions de latex en agitant
vigoureusement après avoir vidé le compte-gouttes.
2.
Déposer une goutte de latex test sur un cercle de la lame
de réaction, près du bord du cercle.
3.
Ajouter une goutte de solution saline à l’aide d’une pipette
Pasteur. S’assurer que le latex et la solution saline ne se
mélangent pas.
4.
Prélever à l’oese une partie de la colonie à tester et
l’émulsionner dans la solution saline de façon à obtenir une
suspension fine et homogène.
5.
Mélanger cette suspension et le latex test en couvrant toute
la surface du cercle de réaction.
6.
Imprimer à la lame un mouvement de rotation et observer
l’agglutination. L’agglutination doit apparaître en une minute
maximum. Ne pas utiliser de loupe pour la lecture.
7.
Si aucune agglutination n’apparaît, tester une autre colonie.
8.
S’il y a agglutination, tester l’autre partie de la colonie avec
le latex de contrôle pour s’assurer que la souche n’est pas
autoagglutinable.
9.
Éliminer la lame de réaction dans une solution désinfectante
10.
Interprétation des résultats
L’agglutination du latex test en moins d’une minute signe un
résultat positif et indique la présence d’E. coli O157.
Si aucune agglutination n’apparaît en une minute, le résultat est
Si cette réaction filamenteuse est trop importante pour permettre
une interprétation correcte, mettre la colonie en suspension dans
0,3 ml de solution saline. Laisser sédimenter les particules et
tester le surnageant.
11.
Limites du test
Lorsqu’un résultat positif est obtenu avec une colonie non
identifiée, des tests biochimiques doivent être réalisés pour
confirmer qu’il s’agit bien d’une souche d’E. coli.
Référence de catalogue
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Consulter le mode d’emploi
Limite de température
Code de lot
A utiliser avant
Fabricant
Ni la gélose Mac Conkey au sorbitol, ni le test au latex, ne peuvent
prouver que la souche isolée est une souche productrice de
toxine.
A l’inverse, d’autres sérotypes peuvent produire une vérocytotoxine
Certaines souches d’Escherichia hermanii peuvent présenter
une fraction antigénique commune avec E. coli O157 et peuvent
donc donner une réaction croisée avec le test au latex (Borczyk
et coll.)1.
E. hermanii peut être différencié d’E. coli car il fermente le
cellobiose, pousse en présence de KCN et produit un pigment
jaune qui peut apparaître tardivement10.
12.
Performance du test
Les essais cliniques ont montré une corrélation de 99,3%
(151/152) entre le test Oxoid et les antisérums disponibles9.
La sensibilité du test est de 100% (49/49) et la spécificité de 99%
(101/103)
L’échantillon divergent a été testé avec un troisième antisérum
et a été trouvé positif en Ag O157. Ceci était en accord avec les
résultats du test Oxoid.
Le réactif Oxoid n’a pas montré de réactions croisées avec d’autres
sérotypes d’E. coli ou des germes ne fermentant pas le sorbitol.
Il a été testé sur différents milieux de culture et aucun n’a donné
d’interférence.
ATTENTION: Ce produit contient d’azoture de sodium. Nocif en
cas d’ingestion.
13.
References
1.
Borczyk A. Lior H. Crebin B (1987) Int. J. Food. Microbiol. 4, 347-349.
2.
Konowalchuk, J., Speirs, J. and Stavric S. (1977) Infect. Immun. 18,
775-779.
3.
Scotland S., Day N. and Rowe B. (1980) FEMS. Microbiol. Lett,7, 15-17.
4.
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5.
Karmali M, Still, B., Petrick M., and Lim C. (1983),Lancet i,619-620.
6.
Johnson,W., Liroh, H. and Bezanson. (1983) Lancet i, 76.
7.
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8.
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Microbial. 25, 1043-1047.
9.
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identifying Escherichia coli O157.42:1109-1110.
10. Bremer et al (1982) Journal of Clinical Microbiology Vol. 15 No.4 p.703
X4147C Révisé Mars 2013
OXOID Limited, Wade Road, Basingstoke, Hampshire, RG24 8PW, UK
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