Thermo Fisher Scientific IMAGEN Chlamydia Mode d'emploi

IMAGEN Chlamydia
K610111-2
50
FR
Test pour la détection de Chlamydia par immunofluorescence
directe.
1.
MODE D’EMPLOI
Le test IMAGEN™ Chlamydia est un test d’immunofluorescence
directe qualitatif pour la détection de Chlamydia dans des
échantillons uro-génitaux ou ophtalmiques humains ainsi que
pour la confirmation des Chlamydiae en culture cellulaire.
2.
RESUME
Les Chlamydiae sont des parasites intracellulaires obligatoires,
étroitement liés aux entérobactéries1. Le genre Chlamydia
comporte trois espèces connues: Chlamydia trachomatis (C.
trachomatis), Chlamydia psittaci (C. psittaci) et Chlamydia
pneumoniae (TWAR).
Le cycle de vie des Chlamydiae est complexe, mais deux structures
principales sont connues, le corps élémentaire infectieux et le
corps réticulé. L’infection d’une cellule commence quand le corps
élémentaire adhère à la surface de la cellule-hôte et se fraye un
passage dans la cellule par endocytose. Le corps élémentaire se
développe à l’intérieur de la vacuole formée par la membrane de
la cellule-hôte et se différencie pour former les corps réticulés.
Les corps réticulés sont seuls impliqués dans la multiplication des
Chlamydiae et se divisent par fission binaire en utilisant l’apport
énergétique de la cellule-hôte. Environ 24 heures après l’infection,
les corps réticulés se différencient à l’intérieur de l’inclusion pour
former des corps élémentaires. Le cycle de reproduction dure
entre 48 et 72 heures et se termine par la rupture de l’inclusion
et la libération des corps élémentaires. Une inclusion arrivée
à maturité peut contenir environ 104 corps élémentaires de
Chlamydiae et occuper 75% du volume de la cellule-hôte.
C. trachomatis (ou trachome) a été reconnu comme source
fréquente des maladies sexuellement transmissibles1,2 et on a
montré qu’il occasionnait une grande variété d’infections chez
l’homme (dont certaines peuvent être asymptomatiques).
Chez l’adulte, C. trachomatis peut également occasionner une
conjonctivite folliculaire aiguë ou sub-aiguë qui risque d’évoluer
en kératite ponctuée. Occasionnellement peut se développer un
trachome cicatriciel et endémique. La plupart de ces symptômes
se développent chez les patients souffrant d’infections génitales
non reconnues1,3. L’ophtalmie des nouveau-nés est une
complication de la maladie chez les enfants nés de mère infectée.
Les sites anatomiques où l’on effectue généralement les
prélèvements en vue de diagnostiquer le Chlamydia sont
la conjonctive, le canal cervical utérin et l’urètre. Chez les
hommes, et plus particulièrement les adolescents et les hommes
asymptomatiques examinés suite au tracé de contact posthospitalier, il peut s’avérer impossible de prélever des échantillons
urétraux par voie interne. Dans ce cas, il est suggéré d’utiliser
des échantillons de la première urine du matin et d’examiner le
dépôt centrifugé4. Des échantillons respiratoires (par exemple,
sputum) ont également été examinés directement, en vue de
détecter C. psittaci et C. pneumoniae dans le cadre du dépistage
des infections respiratoires5,6.
Il existe actuellement 3 méthodes principales de diagnostic
utilisées pour détecter les Chlamydiae dans des échantillons
cliniques. La première isole l’organisme et le visualise; les corps
élémentaires viables présents dans les échantillons cliniques
infectent les cellules de culture de tissus et les inclusions qui en
résultent sont mises en évidence par des techniques de coloration
comme, par exemple, l’iode ou l’immunofluorescence. La seconde
méthode met directement en évidence les Chlamydiae dans
les échantillons cliniques en utilisant un anticorps monoclonal
marqué à la fluorescéine.
La troisième consiste à utiliser un test immuno-enzymatique (par
exemple IDEIA Chlamydia) afin de déterminer la présence de
l’antigène de Chlamydia dans les échantillons cliniques7.
Les techniques d’immunofluorescence directe qui utilisent des
anticorps monoclonaux marqués à la fluorescéine8,9,10 ont révélé
une bonne corrélation par rapport aux techniques de culture
cellulaire utilisées pour détecter C. trachomatis.
Le test IMAGEN Chlamydia est un test d’immunofluorescence
directe conçu pour détecter et identifier les Chlamydiae dans des
échantillons cliniques ou des cultures cellulaires. Le test utilise
un anticorps monoclonal spécifique du genre de l’antigène de
Chlamydia lipopolysaccharide présent dans toutes les souches
connues de Chlamydiae.
3.
PRINCIPE DU TEST
Le réactif du test IMAGEN Chlamydia contient un anticorps
monoclonal conjugué à de l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC).
L’anticorps monoclonal spécifique du genre détecte les corps
élémentaires de toutes les espèces humaines de C. trachomatis
connues, ainsi que des souches de C. psittaci et C. pneumoniae.
L’anticorps conjugué est utilisé dans le cadre d’une technique
d’immunofluorescence directe en une étape. Les échantillons
sont incubés avec le réactif conjugué au FITC pendant 15 minutes.
L’excès de réactif est ensuite éliminé par lavage à l’aide d’une
solution saline tamponnée au phosphate (PBS), les zones colorées
sont montées entre lame et lamelle et examinées au moyen d’un
éclairage épifluorescent.
Si des Chlamydia sont présents dans l’échantillon clinique, ils
apparaissent sous forme de corps élémentaires fluorescent
vert pomme, vifs, qui contrastent avec la couleur du réactif de
contraste. Les monocouches de culture cellulaire infectées,
colorées à l’aide de l’anticorps monoclonal conjugué au FITC,
contiennent des inclusions intracytoplasmiques vert pomme de
Chlamydia qui se différencient de la coloration de l’arrière-plan
cellulaire coloré par le réactif de contraste.
Remerciements
L’anticorps monoclonal a été produit par le Department of
Pathology, University of Cambridge, Cambridge, Royaume-Uni et
la Division of Communicable Diseases, Clinical Research Centre,
Harrow, Middlesex, Royaume-Uni.
4.
DEFINITIONS
Les symboles suivants sont utilisés dans l’ensemble des
informations relatives au produit.
Numéro de catalogue
Consulter les instructions d’utilisation
N
Contenu suffisant pour <N> tests
Fabricant
Dispositif médical de diagnostic In vitro
5.
Utilisez par date
6mm (100 lames par boîte) disponible chez votre distributeur
local, (Code n ° S611430-6).
Code du Lot
IMAGEN Chlamydia Positive Control Slides (Code No S610930-2).
Limites de température
Kit de prélèvement d’échantillons Chlamydia - disponible par 20,
en boîte-distributeur, (Code No. S610730-2).
REACTIFS FOURNIS
50 - Chaque kit contient suffisamment de réactif pour traiter
50 préparations de culture cellulaire. - La date de péremption
du kit est indiquée sur l’étiquette extérieure de la boîte.
5.1.
REACTIF IMAGEN CHLAMYDIA
Un livret d’instructions d’utilisation.
2 x 1 lame de contrôle positif contenant des
cellules de tissu conjonctif de souris fixées à
l’acétone (L929) infectées par la souche L1 de
C. trachomatis.
Un flacon de chacun des produits suivants:
3mL de liquide de montage. Le liquide
de montage contient un inhibiteur de
blanchissage optique dans une solution de
glycérol (pH 10,0).
1,4mL du réactif de test IMAGEN Chlamydia.
Ce réactif contient de l’anticorps monoclonal
murin purifié spécifique du genre Chlamydia,
conjugué à du FITC.
5.2. PREPARATION, STOCKAGE ET REUTILISATION DES
COMPOSANTS DU KIT
Pour des performances optimales, il convient de stocker tous les
composants du kit inutilisés en respectant les consignes suivantes.
5.3. LAMES DE CONTROLE POSITIF Les lames de contrôle positif sont fournies dans des poches
individuelles étanches avec de l’azote. Conserver les lames
inutilisées à une température comprise entre 2-8°C. Laisser
reposer la lame pendant 5 minutes à température ambiante
(15-30°C) avant ouverture.
Utiliser la lame immédiatement après ouverture de l’emballage.
5.4. LIQUIDE DE MONTAGE Prêt à l’emploi. Conserver le liquide de montage inutilisé à une
température comprise entre 2-8°C. Il faut laisser reposer le
liquide de montage à température ambiante (15-30°C) pendant
5 minutes avant utilisation.
5.5. REACTIF Prêt à l’emploi. Conserver le réactif inutilisé à l’abri de la lumière,
à une température comprise entre 2-8°C. Laisser reposer le réactif
pendant 5 minutes à température ambiante (15-30°C) avant
ouverture.
6.
REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON
FOURNIS
6.1. REACTIFS
Fresh acétone (pour la fixation).
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS), pH 7,5, pour le
lavage des échantillons et monocouches colorés.
6.2. ACCESSOIRES
Les produits suivants doivent être utilisés avec IMAGEN Chlamydia.
Contactez votre distributeur local pour plus d’informations.
Téflon lames de microscope en verre avec bien seul diamètre
7.
EQUIPMENT
Le matériel suivant est nécessaire:
Pipette de précision et embouts jetables pour des quantités de
25µL
Bain de lavage
Lamelles pour des puits de 6mm de diamètre
Huile d’immersion non fluorescente
Microscope épifluorescent avec filtre pour FITC (longueur d’onde
d’excitation maximale 490nm, longueur d’onde d’émission
moyenne 520nm) et lentilles pour amplification x200-x400 et
x600-x1000
Incubateur à 37°C
Centrifugeuse basse vitesse
Pour confirmation de culture
Ecouvillons stériles et milieu de transport adapté au prélèvement,
au transport et à la culture des Chlamydiae
Lignées de culture cellulaire recommandées pour l’isolation de
Chlamydia
8.
PRECAUTIONS
- Pour usage diagnostique in vitro. L’utilisateur doit
maitriser les procédures générales de laboratoire et être
spécifiquement formé pour l’emploi de ce test.
8.1. MESURES DE SECURITE
8.1.1
Le réactif IMAGEN test de Chlamydia contient <0,1%
d’azoture de sodium, qui est un poison. L’azide de
sodium risque de réagir avec les canalisations de plomb
ou de cuivre, formant ainsi des azides de métal très
explosifs. Toujours éliminer les matériaux contenant de
l’azide en rinçant avec de grandes quantités d’eau.
8.1.2
Les Chlamydiae de la lame de contrôle positif se sont
révélés non infectieux lors de la culture cellulaire.
Toutefois, il convient de manipuler et d’éliminer la lame
comme susceptible d’être infectieuse.
8.1.3
Présence du colorant bleu Evans dans le réactif. Bien que
le produit soit en concentrations inférieures à celles qui
requièrent qu’on le classe comme cancérogène, éviter
tout contact avec la peau.
8.1.4
Mounting Fluid contient un produit irritant pour la
peau : des précautions particulières doivent donc être
prises lors de son utilisation. Bien que le produit soit en
concentrations inférieures à celles qui requièrent qu’on
le classe comme irritant, rincer la peau sous l’eau en cas
de contact.
8.1.5
Le réactif du test IMAGEN Chlamydia contient des
immunoglobulines humaines. Ce composé a donné
des résultats négatifs pour la présence d’anticorps
anti-HIV, et d’antigène de surface de l’hépatite C et de
l’hépatite B. Néanmoins il convient de le manipuler avec
précaution et de le considérer comme potentiellement
infectieux.
8.1.6
Ne pas manger, boire, fumer, conserver ou préparer de
la nourriture, ni utiliser des cosmétiques dans les lieux
d’utilisation.
Ne pas pipéter les solutions à la bouche.
Porter des gants jetables lors de la manipulation
des échantillons cliniques et des cellules infectées
et toujours se laver les mains après avoir utilisé des
substances infectieuses.
8.1.9
L’élimination de tous les échantillons cliniques doit avoir
lieu conformément à la législation en vigueur.
8.1.10 Fixe toxicologique disponible pour les utilisateurs
professionnels, sur demande.
8.2. 8.2 PRECAUTIONS TECHNIQUES
8.2.1
Ne pas utiliser les composants après la date d’expiration
imprimée sur les étiquettes. Ne pas mélanger différents
lots de réactifs.
8.2.2
Les réactifs sont fournis à des concentrations dosées
fixes. Les performances du dosage seront altérées si les
réactifs sont conservés dans des conditions autres que
celles décrites dans la Section 5.
8.2.3
Préparer de la solution saline tamponnée au phosphate
(PBS) fraîche, selon les besoins, le jour de son utilisation.
8.2.4
Le lavage dans du PBS est nécessaire. L’utilisation
d’autres solutions de lavage, comme l’eau du robinet ou
l’eau distillée, compromettrait les résultats du test.
8.2.5
Eviter la contamination microbienne des réactifs.
8.2.6
Ne pas congeler les réactifs.
9.
PRELEVEMENT ETPREPARATION DES ECHANTILLONS7,8
Les échantillons, prélevés dans l’urètre chez l’homme, le col
utérin chez la femme et sur la conjonctive, doivent contenir
autant de cellules épithéliales que possible, dans la mesure où les
Chlamydiae sont des organismes intracellulaires qui infectent les
surfaces épithéliales1.
8.1.7
8.1.8
9.1. ECHANTILLONS CLINIQUES
9.1.1 Echantillon urétral (hommes)
Effectuer le frottis urétral en insérant dans l’urètre, sur 2-4cm, un
écouvillon fin à embout en alginate ou en coton. Faire tourner
plusieurs fois l’écouvillon puis le retirer de l’urètre.
9.1.2
Echantillon endocervical (femmes)
à préparer la lame avec la totalité de l’embout d’écouvillon.
Laisser l’échantillon sécher complètement à l’air libre, à
température ambiante (15-30°C), puis fixer dans l’acétone
frais pendant 10 minutes. Laisser la lame sécher à l’air libre.
Si l’échantillon n’est pas immédiatement coloré, conserver à
4°Cpendant une nuit ou conserver congelé à –20°C pendant
2 mois maximum.
9.2. MONOCOUCHES DE CULTURE CELLULAIRE
Eliminer le milieu de la surface de la monocouche. Ne pas laisser
sécher les cellules car les corps d’inclusion risquent d’éclater.
Fixer immédiatement la monocouche dans du méthanol frais
pendant 10 minutes, puis sécher convenablement à l’aide de
papier absorbant. Les monocouches fixées doivent être colorées
immédiatement. Elles peuvent toutefois être conservées une nuit
à 4°C avant la coloration.
10.
MODE OPERATOIRE
VEUILLEZ CONSULTER LA SECTION 8.2,
TECHNIQUES, AVANT DE RÉALISER LE TEST.
PRÉCAUTIONS
10.1. AJOUT DU REACTIF
Ajouter 25µL de réactif sur l’échantillon fixé (voir Section 9.1),
la monocouche de culture cellulaire fixée (voir Section 9.2) ou
la lame de contrôle positif. Veiller à ce que le réactif recouvre le
puits en totalité.
10.2. PREMIERE INCUBATION
Incuber les lames avec le réactif dans une chambre humide
pendant 15 minutes à 37°C. Ne pas laisser le réactif sécher sur
l’échantillon: ceci entraînerait une coloration non spécifique.
10.3. LAVAGE DE LA LAME
Eliminer le réactif en excès avec de la solution saline tamponnée
au phosphate (PBS) puis laver doucement la lame dans un bain
sous agitation contenant de la solution PBS, pendant 5 minutes.
Eliminer la solution PBS et laisser la lame sécher à l’air libre à
température ambiante (15-30°C).
10.4. AJOUT DU LIQUIDE DE MONTAGE
Ajouter une goutte de liquide de montage au centre de chaque
puits et placer un couvre-objet sur le liquide de montage et sur
l’échantillon, en veillant à ne pas piéger de bulles d’air.
de formes intermédiaires de Chlamydia ou de corps réticulés.
Parfois, de grandes inclusions de Chlamydia intracytoplasmiques
intactes, très fluorescentes, apparaissent.
11.1.2 Contrôle négatif
Si un contrôle négatif s’avère nécessaire, il est recommandé
d’utiliser des cellules intactes non contaminées ou rompues d’un
type semblable à celles utilisées pour la culture et l’isolation
de Chlamydia. Les cellules doivent être préparées et fixées
conformément aux indications de la Section 9.2 et colorées
comme indiqué à la Section 10.
11.2. ECHANTILLONS CLINIQUES
11.2.1 Apparition de Corps de Chlamydia
Les corps élémentaires extracellulaires constituent la forme la
plus courante de chlamydia dans les échantillons cliniques et
se présentent sous la forme de corps aux contours lisses, vert
pomme, vifs, d’environ 300nm de diamètre, comme indiqué à la
Section 11.1.1.
11.2.2 Interprétation des Résultats
Le diagnostic est positif lorsque les échantillons colorés et fixés
présentent au moins 10 corps de Chlamydia. Ce nombre a été
défini de manière à limiter les résultats positifs erronés dus à une
mauvaise interprétation de la fluorescence non spécifique. Les
cellules contre-colorées doivent être visibles à l’intérieur d’un
puits pour permettre de conclure à un résultat négatif. Il peut
s’agir de cellules épithéliales cylindriques ou squameuses, intactes
ou brisées, ou même de leucocytes polymorphonucléaires. Si le
prélèvement des échantillons n’a pas été correctement effectué,
il risque de ne pas y avoir de substance cellulaire, auquel cas il
convient de recommencer le prélèvement.
11.2.3 Fluorescence Non Spécifique
Les substances de forme irrégulière dont la morphologie
diffère des corps de chlamydia décrits à la Section 11.1.1 et qui
présentent une fluorescence blanche, rouge ou jaune plutôt que
vert pomme doivent être considérées comme étant le résultat
d’une coloration non spécifique.
11.3. CONFIRMATION DE LA CULTURE CELLULAIRE
11.3.1 Apparition d’Inclusions de Chlamydia
Avant d’effectuer un prélèvement endocervical, nettoyer
l’orifice cervical à l’aide de gaze stérile pour éliminer tout excès
de mucus, de sang/pus, etc. Effectuer le frottis endocervical en
insérant dans le canal cervical, sur environ 1cm, un écouvillon à
embout en alginate ou en coton ou une brosse cytologique. Faire
tourner l’écouvillon plusieurs fois au niveau de la jonction entre
l’épithélium prismatique et l’épithélium squameux, puis retirer
l’écouvillon sans toucher les surfaces vaginales.
10.5. LECTURE DE LA LAME
Examiner au microscope à épifluorescence la totalité du puits
contenant l’échantillon coloré. La fluorescence doit être visible
à un grossissement de x200 à x500 (voir Section 11). (Pour
obtenir des résultats optimums, il convient d’examiner les lames
immédiatement après coloration; celles-ci peuvent cependant
être conservées entre 2-8°C, à l’abri de la lumière, pendant 24
heures maximum).
Les inclusions intracellulaires de chlamydia se présentent
comme des sacs vert pomme, dans le cytoplasme des cellules
contaminées. Une inclusion peut occuper jusqu’à 75% du
cytoplasme de la cellule-hôte.
9.1.3
11.
INTERPRETATION DES RESULTATS DU TEST
11.1. CONTRÔLES
11.1.1 Lames de contrôle positifs
12.
LIMITES DU TEST
12.1. L’apparence visuelle de l’image de fluorescence obtenue
peut varier en fonction du type de microscope et de la
source lumineuse utilisée.
Echantillon ophtalmique
Appliquer sur l’œil un anesthésique local; ensuite, exposer la
conjonctive supérieure et inférieure. En utilisant un écouvillon
à embout en coton ou en Dacron®, frotter vigoureusement les
surfaces conjonctivales supérieure et inférieure, en faisant
tourner l’écouvillon au cours du prélèvement pour que la totalité
de la surface conjonctivale soit échantillonnée.
REMARQUE: Le kit de prélèvement d’échantillons IMAGEN
Chlamydia (voir Section 6.2) convient pour le prélèvement des
échantillons mentionnés ci-dessus.
9.1.4
Préparation des lames
Faire tourner l’écouvillon d’échantillon en appliquant une légère
pression, sur le puits de 6mm de la lame pour microscope. Veiller
Lors de l’examen conformément aux instructions de la Section 10,
la lame de contrôle positif doit présenter des corps élémentaires
extracellulaires (CE) sous la forme de très petits cercles
fluorescents, vert pomme, vifs, aux contours lisses, d’environ
300nm de diamètre. Ces corps élémentaires se détachent sur un
fond de cellules et débris cellulaires colorés en rouge.
D’autres formes de Chlamydia, 2-3 fois plus grandes que les CE,
peuvent également apparaître; certaines d’entre elles présentent
la même fluorescence ou leur centre est noir et entouré d’une
auréole de fluorescence vert pomme. Il s’agit là probablement
11.3.2
Interprétation des Résultats
Le diagnostic est positif lorsqu’une ou plusieurs inclusions
intracellulaires de Chlamydia colorées apparaissent dans la
monocouche.
12.2. Utiliser exclusivement le liquide de montage fourni.
12.3. Il est recommandé d’utiliser 25µL de réactif pour couvrir
la surface d’un puits de 6mm. Si ce volume est réduit,
il risque de s’avérer difficile de recouvrir la surface de
l’échantillon, au risque de diminuer la sensibilité.
12.4. Tous les réactifs sont fournis pour des dilutions
déterminées. Les performances du test risquent d’être
altérées si les réactifs sont modifiés de quelque façon que
ce soit ou s’ils ne sont pas conservés dans les conditions
recommandées, comme indiqué à la Section 5.1.
12.5. La non détection de Chlamydia dans une culture cellulaire
peut résulter de divers facteurs, comme le prélèvement
de l’échantillon à un moment inapproprié de l’évolution
de la maladie, le prélèvement et/ou la manipulation
inappropriés de l’échantillon, une culture cellulaire
défectueuse, etc. Un résultat négatif n’exclut donc pas la
possibilité d’une infection par Chlamydia.
12.6. Les systèmes de détection d’antigène tels que le test
IMAGEN Chlamydia ne doivent pas être utilisés pour
obtenir des informations dans le cadre d’examens
médico-légaux. Seules les cultures standard de Chlamydia
peuvent être utilisées pour évaluer des cas d’abus ou
autres dans lesquels l’éventualité d’un résultat faux positif
aux systèmes de détection d’antigène est inacceptable11.
12.7. La présence de chlamydia dans les échantillons cliniques
n’exclue pas nécessairement la possibilité d’une infection
concomitante due à d’autres pathogènes. Les résultats
doivent être interprétés conjointement aux informations
recueillies à partir des études épidémiologiques, de
l’examen clinique du patient et d’autres procédures de
diagnostic.
13.
VALEURS NORMALES
Le taux de prévalence des infections à Chlamydia dans une étude
de population varie en fonction du type de population étudié1,2.
Le taux de prévalence des infections uro-génitales par Chlamydia
pour des patients non sélectionnés, suivis par un centre de
médecine génito-urinaire, varie entre 10% et 25%.
En ce qui concerne les patients soignés pour urétrite non
spécifique ou urétrite blennorragique, le taux peut atteindre 30%
à 60%.
On constate un taux de prévalence d’infections uro-génitales
moins élevé (moins de 10%) chez les patients suivis par des
cliniques obstétriques et gynécologiques1,12.
Le taux de prévalence des infections ophtalmiques par Chlamydia
peut varier entre 5% et 20% dans le cadre d’études consacrées au
paratrachome (conjonctivite à inclusions)1,9.
14.
PERFORMANCES CARACTERISTIQUES
14.1. SPECIFICITE DE L’ANTICORPS MONOCLONAL
Il a été démontré que l’anticorps monoclonal utilisé dans le réactif
IMAGEN Chlamydia réagissait avec un épitope de Chlamydia
lipopolysaccharide commun à toutes les souches de Chlamydiae.
Une coloration non spécifique apparaît parfois lors de la
coloration immunochimique, et ce en raison de liaisons entre les
fragments Fc de l’anticorps et la protéine A produite par certaines
souches de Staphylococcus aureus. Le réactif IMAGEN Chlamydia
a été conçu pour réduire de telles liaisons.
14.2. PERFORMANCES CLINIQUES13
14.2.1 Echantillons uro-genitaux
Le test IMAGEN Chlamydia a été évalué par 2 laboratoires de
diagnostic par rapport à des systèmes de culture cellulaire
reconnus (coloration Giemsa de monocouches de cellules
McCoy prétaitées après culture primaire avec les échantillons).
Des échantillons urétraux et cervicaux ont été prélevés sur des
patients non sélectionnés, suivis par des centres de traitement
des maladies sexuellement transmissibles. Le taux d’infections
par Chlamydia pour les groupes de population étudiés variait
entre 10% et 20%. On a réalisé des frottis à partir de prélèvements,
à la clinique, et ces prélèvements ont ensuite été placés dans
un milieu de transport en vue de leur évaluation par culture
cellulaire.
Un échantillon était considéré comme positif dans le cadre du test
IMAGEN Chlamydia lorsqu’on observait un minimum de 10 corps
fluorescents (voir Section 11.2.2). Un échantillon était considéré
comme positif selon le test de culture cellulaire lorsqu’on observait
au moins une inclusion de Chlamydia intracytoplasmique colorée.
Le tableau 14.1 présente les résultats de 2 études. Sur les 935
échantillons testés, on a obtenu le même résultat d’après les deux
méthodes dans 898 cas, soit une corrélation de 96%. La sensibilité
et la spécificité générales du test IMAGEN Chlamydia atteignent
respectivement 92% et 97%, en supposant que les méthodes
de culture cellulaire soient à 100% sensibles et spécifiques.
Les valeurs prédictives des tests positifs et négatifs atteignent
respectivement 84% et 98%.
Tableau 14.1
Comparaison des résultats obtenus par
culture cellulaire et avec le test IMAGEN Chlamydia sur des
échantillons uro-génitaux
TEST
Culture cellulaire
IMAGEN Chlamydia
Centre 1
Centre 2
Total
RESULTAT
Négatif
Négatif
337
427
764
Positif
Positif
74
60
134
Positif
Négatif
4
8
12
Négatif
Positif
17
8
25
14.2.2 Echantillons Ophtalmiques
Le test IMAGEN Chlamydia a été évalué dans un laboratoire de
diagnostic ordinaire par rapport à un système de culture cellulaire
reconnu (coloration Giemsa de monocouches de cellules McCoy
prétraitées après culture primaire avec des échantillons). On a
prélevé des échantillons conjonctifs sur 178 patients atteints de
conjonctivite à inclusions fréquentant un service d’ophtalmologie;
163 d’entre eux étaient âgés de 13 à 55 ans, 3 bébés (10 semaines
à 12 mois) et 12 nouveau-nés (12 jours à 4 semaines). Le taux
de prévalence d’infections à Chlamydia dans le groupe de
population étudié atteignait 8%. On a réalisé des frottis à partir
de prélèvements, à la clinique, et ces prélèvement ont été placés
dans un milieu de transport en vue de leur évaluation par culture
cellulaire. Un échantillon était considéré comme positif selon le
test IMAGEN Chlamydia lorsqu’au moins 10 corps fluorescents
étaient observés (voir Section 11.2.2).
Un échantillon était considéré comme positif selon la culture
cellulaire lorsqu’au moins une inclusion intracytoplasmique
colorée était observée.
Le tableau 14.2 reprend les résultats de cette étude. Sur les 178
échantillons testés, on a obtenu les mêmes résultats avec les deux
méthodes dans 174 cas, soit une corrélation de 98%.
La sensibilité et la spécificité du test IMAGEN Chlamydia
atteignent respectivement 100% et 97,5%, en supposant que la
méthode de culture cellulaire soit à 100% sensible et spécifique.
Les valeurs prédictives pour les tests positifs et négatifs atteignent
respectivement 79% et 100%.
Streptococcus pyogenes
Tableau 14.2
Comparaison des résultats du test selon la
culture cellulaire et selon le test IMAGEN Chlamydia sur des
échantillons ophtalmiques
TEST
Culture cellulaire
IMAGEN Chlamydia
Nombre d’échantillons
RESULTAT
Négatif
Négatif
159
Positif
Positif
15
Positif
Négatif
0
Négatif
Positif
4*
*
Ces échantillons ont été prélevés sur des patients soumis à
un traitement par antibiotiques. Ce traitement peut avoir
influencé le résultat de la culture cellulaire9.
14.2.3 Confirmation de la culture cellulaire
Le test IMAGEN Chlamydia a été évalué en tant que test
de confirmation de culture par rapport à 2 procédures de
confirmation de culture généralement utilisées (Giemsa et
iode). 132 échantillons uro-génitaux ont chacun été inoculés sur
3 monocouches de cellules (flacon cylindrique) McCoy traitées à
l’iododéoxyuridine. Les monocouches inoculées ont été incubées
à 37°C pendant 48 à 72 heures, puis fixées dans du méthanol
pendant 10 minutes. Les monocouches fixées ont ensuite été
colorées par Giemsa, iode ou réactif du test IMAGEN Chlamydia.
Un échantillon était considéré comme positif lorsqu’au moins
une inclusion intracytoplasmique colorée était observée au
microscope.
Le tableau 14.3 présente les résultats de cette étude. Sur les 132
échantillons testés, 56 (42%) ont développé des corps à inclusion.
La coloration à l’iode a décelé le Chlamydia dans 46 échantillons,
la coloration Giemsa dans 49 échantillons et IMAGEN Chlamydia
dans 56 échantillons.
Tableau 14.3
Comparaison des méthodes de coloration
pour détection des inclusions de Chlamydia dans la culture en
flacons cylindriques
TEST
RESULTAT
IMAGEN Chlamydia
Positif
Coloration Giemsa
Positif
Coloration à l’iode
Positif
Nombre d’échantillons
42
Lactobacillus lactis
Listeria monocytogenes
Mycoplasma orale
Mycoplasma hominis
Virus
Herpes simplex virus
15.
Chlamydial Disease (1983)
2.
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5.
6.
7.
Positif
Négatif
Négatif
3
Positif
Positif
Négatif
7
Positif
Négatif
Positif
4
14.3. REACTIVITE CROISEE
Il a été démontré que l’anticorps monoclonal utilisé pour le test
IMAGEN Chlamydia ne réagit pas avec les micro-organismes listés
ci-dessous.
Acholeplasma laidlawii
Acinetobacter calcoaceticus var
anitratus
Aeromonas hydrophila
Bacteroides fragilis
Bacillus cereus
Campylobacter coli
Candida albicans
Citrobacter freundii
Clostridium perfringens
Clostridium difficile
Enterobacter cloacae
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Gardnerella vaginalis
Haemophilus influenzae
Klebsiella aerogenes
Mycoplasma arginini
Mycoplasma hyorhinis
Mycoplasma pneumoniae
Mycoplasma genitalium
Neisseria gonorrhoeae
Peptococcus sp
Peptostreptococcus anaerobius
Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella minnesota
Serratia marcescens
Shigella sonnei
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus
Streptococcus agalactiae
Streptococcus dysgalactiae
8.
9.
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Négatif
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subsp. equisimilis
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Ureaplasma sp
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From Proceedings of the Sixth International Symposium on Human
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OXOID Limited, Wade Road, Basingstoke,
Hampshire, RG24 8PW, Royaume-Uni
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