Thermo Scientific Thrombo-Wellcotest Mode d'emploi

Thrombo-Wellcotest*
FR
R30852601
1. DOMAINE D’APPLICATION
Le Thrombo-Wellcotest* est destiné au dosage semi-quantitatif
rapide des produits de dégradation de la fibrine et du fibrinogène
(PDF) dans les échantillons de sérum et d’urine humains.
Le Thrombo-Wellcotest a été classifié comme modérément
complexe dans le cadre de la loi américaine « Clinical Laboratory
Improvement Act (CLIA88) ».
2. RESUME ET EXPLICATION DU TEST
Ferri et Ferreira1 ont été les premiers à mettre en évidence
la présence de produits de dégradation du fibrinogène (PDF)
dans des sérums pathologiques ; par la suite, la mise au point
d’une méthode de dosage immunologique par inhibition de
l’hémagglutination2,3 et l’amélioration de sa sensibilité ont rendu
possible la détection des PDF chez 95% des individus normaux.
La concentration normale de PDF est, au repos, d’environ 5
µg/ml4 ; elle augmente à l’effort5 et sous l’effet de l’angoisse et
d’autres types de stress,6 mais ces variations sont faibles par
rapport aux concentrations fortement élevées que l’on observe
lors des épisodes thrombotiques de toute nature, parmi lesquels
l’infarctus du myocarde, la thrombose post-opératoire des
veines profondes7 et certains troubles gravidiques (grossesse).
Une augmentation de la concentration de PDF est un signe
diagnostique précoce de dépôt accru de fibrine ou de thrombose
déclarée et des concentrations exceptionnellement élevées ont
été constatées dans l’embolie pulmonaire.
Le Thrombo-Wellcotest est particulièrement utile comme
méthode de dépistage dans le diagnostic de la coagulation
intravasculaire disséminée.8
La valeur du dosage des PDF dans l’urine a été étudiée. Chez
les individus normaux, les PDF ne sont pas décelables dans
l’urine, mais des concentrations allant jusqu’à 100 µg/ml ont été
enregistrées dans certains types de néphropathies9 ; ce test a
une valeur prédictive prouvée dans le diagnostic différentiel chez
les patients atteints de glomérulonéphrite10 et dans le suivi des
patients ayant subi une transplantation rénale.11,12
Le Thrombo-Wellcotest est un test simple et rapide qui permet
l’examen de routine de tous les malades chez qui il existe un
risque particulier. Le test est une méthode d’agglutination sur
lame : une goutte d’échantillon et une goutte de suspension latex
sont mélangées en agitant doucement pendant 2 minutes. Une
agglutination à la fin de cette période indique la présence d’au
moins 2 µg/ml de PDF dans l’échantillon testé. En analysant les
échantillons à 2 dilutions différentes, on peut obtenir une valeur
approximative de la concentration de PDF.
Le Thrombo-Wellcotest permet de déceler la présence de tous les
principaux produits de dégradation de la fibrine ou du fibrinogène
et les résultats obtenus par ce test au latex montrent une
bonne corrélation avec ceux obtenus par la méthode de dosage
immunologique par inhibition de l’hémagglutination.13,14,15
3. Principe DE LA MÉTHODE
Des antisérums spécifiques de préparations hautement purifiées
des fragments D et E du fibrinogène humain sont produits.
Après absorption en phase solide pour éliminer les anticorps
dirigés contre toutes les autres protéines sériques, les globulines
spécifiques sont extraites, puis fixées par adsorption sur des
particules de latex en suspension dans du tampon salin glycine.
La sensibilité du réactif au latex est ajustée de telle sorte qu’en
présence de concentrations de PDF supérieures ou égales à 2
µg/ml (en équivalent de fibrinogène), les particules de latex
s’agglomèrent, donnant une agglutination macroscopique.
4. REACTIFS
COMPOSITION DU COFFRET
Thrombo-Wellcotest
1. Suspension au latex
2. Sérum témoin positif
3. Sérum témoin négatif
4. Tubes de prélèvement d’échantillon
5. Tampon salin glycine
6. Lames test
7. Pipettes à usage unique
8. Bâtonnets d’homogénéisation
à usage unique
9. Poire
10. Mode d’emploi
2 flacons de 25 ml chacun de tampon à pH =
8,2 contenant 0,1% d’azide de sodium.
5. PRECAUTIONS ET RESTRICTIONS D’EMPLOI
Exclusivement destiné au diagnostic in vitro.
Exclusivement réservé à l’usage professionnel.
20 tests (HA13/R30852601)
1 compte-gouttes (bouchon blanc)
1 compte-gouttes (bouchon rouge)
1 compte-gouttes (bouchon bleu)
20
2 compte-gouttes (bouchons blancs)
1
25
1 paquet
Pour des informations sur les composants potentiellement
dangereux, veuillez vous référer aux fiches de sécurité fournies
par le fabricant et aux étiquettes des produits.
INFORMATIONS DE SECURITE
1.
1
1
DESCRIPTION, PREPARATION POUR UTILISATION ET CONDITIONS
DE CONSERVATION RECOMMANDEES
Voir également Précautions et restrictions d’emploi.
2.
Pour garder toute leur réactivité au moins jusqu’à la date de
péremption imprimée sur les étiquettes des flacons, les réactifs
du kit Thrombo-Wellcotest doivent être conservés entre 2 et 8°C.
Les tubes de prélèvement et le tampon salin glycine peuvent être
conservés à une température comprise entre 2 et 25°C.
Aucune purification ou traitement complémentaire des réactifs
n’est nécessaire avant l’emploi.
Suspension latex :
3 ml d’une suspension à 0,75% de particules
de latex polystyrène recouvertes de globuline
de mouton anti-PDF dans un tampon salin
glycine contenant 0,1% d’azide de sodium et
0,4% de Micr-o-protect®.
3.
Sérum témoin positif :
4.
Sérum témoin négatif :
1 ml de sérum humain (non réactif pour
l’AgHBs et les anticorps anti-VIH-1/VIH-2 et
anti-VHC), dilué dans un tampon salin glycine
contenant 0,1% d’azide de sodium.
1 ml de sérum humain (non réactif pour
l’AgHBs et les anticorps anti-VIH-1/VIH-2 et
anti-VHC), dilué dans un tampon salin glycine
contenant 0,1% d’azide de sodium.
Tampon salin glycine :
Tubes de prélèvement :
20 tubes en verre contenant de l’inhibiteur
trypsine de soja (environ 3 600 unités NF/
tube) et du venin de Bothrops atrox (> 10 µg/
tube) destinés à recueillir 2 ml de sang total
ou d’urine.
5.
ATTENTION : Ce kit contient des composants d’origine
humaine. Aucune méthode d’analyse actuellement connue
ne peut garantir de façon absolue que les produits d’origine
humaine ne transmettront pas d’infections. Par conséquent,
tous les produits d’origine humaine doivent être considérés
comme potentiellement infectieux. Le sérum humain
utilisé pour la fabrication des témoins a été trouvé négatif
pour l’AgHBs et les anticorps anti-VIH et anti-VHC. Il est
recommandé de manipuler ces réactifs et les échantillons
humains avec les précautions appropriées en respectant les
bonnes pratiques de laboratoire.
La suspension latex, les sérums témoin positif et négatif et
le tampon salin glycine contiennent 0,1% d’azide de sodium,
lequel est classifié comme nocif (Xn) selon les directives de
la Communauté Economique Européenne (CEE). La nature
des risques particuliers (R) attribués aux préparations
dangeruses est la suivante.
Xn
R22
Nocif en cas d’ingestion
L’azide peut réagir avec le cuivre ou le plomb des
canalisations pour former des sels explosifs. Bien que les
quantités utilisées soient faibles, il est conseillé de rincer
abondamment à l’eau les canalisations dans lesquelles ont
été déversés des réactifs contenant de l’azide.
Les tubes de prélèvement d’échantillon contiennent de
faibles concentrations de substances nocives. Ne pas respirer
les poussières et éviter tout contact avec les yeux.
L’équipement non jetable doit être stérilisé après l’emploi
en utilisant une procédure appropriée ; la méthode
recommandée est la stérilisation par autoclave pendant au
moins 15 minutes à 121°C. Le matériel à usage unique doit
être stérilisé par autoclave ou incinéré. Les éclaboussures de
matériaux potentiellement infectieux doivent être éliminées
immédiatement à l’aide d’un papier absorbant et les surfaces
contaminées doivent être nettoyées avec un désinfectant
anti-bactérien standard ou de l’alcool à 70%. NE PAS utiliser
de chlorure de soude. Le matériel utilisé pour le nettoyage
des éclaboussures, y compris les gants, doit être éliminé
comme s’il s’agissait de déchets biologiquement dangereux.
Pour manipuler les échantillons et effectuer le test, porter
une blouse de laboratoire, des gants à usage unique et des
lunettes de protection. Une fois le test terminé, se laver
soigneusement les mains.
PRECAUTIONS D’ANALYSE
1.
Tous les tests doivent être effectués à une température
ambiante optimale (20 à 25°C) et tous les réactifs doivent
être amenés à cette température optimale avant l’emploi.
2.
La suspension latex doit être homogénéisée soigneusement
en agitant vigoureusement le flacon 3 ou 4 fois juste avant
d’effectuer le test. Les réactifs au latex présentant des signes
d’agrégation lorsqu’ils sont distribués pour la première fois
peuvent avoir été congelés et ne doivent pas être utilisés. Si
le latex ne réagit pas correctement avec les sérums témoins
positif et négatif au cours du test, conformément à la
description, cela indique la détérioration d’un ou plusieurs
réactifs.
3.
Lors de l’utilisation de flacons compte-gouttes, il est
important de les garder en position verticale et de vérifier
que la goutte se forme au niveau de la pointe de l’embout.
Si l’embout du compte-gouttes est mouillé, un volume
incorrect se forme autour de l’extrémité et non pas à la
pointe ; dans ce cas, sécher l’embout avant de continuer.
4.
Les sérums contrôles sont fournis dilués, prêts à l’emploi;
aucune préparation complémentaire n’est nécessaire.
5.
La lame test doit être nettoyée conformément aux
procédures de laboratoires applicables.
PRELEVEMENT ET CONSERVATION DES ECHANTILLONS
Echantillons de sérum :
Prélever du sang à l’aide d’une seringue sèche par ponction
veineuse, sans pose de garrot prolongée, chez le sujet au repos.
Introduire 2 ml de sang à travers le bouchon de l’un des tubes de
prélèvement fournis avec le kit ou enlever le bouchon et verser
2 ml de sang dans le tube. De plus petits volumes de sang (0,5
ml minimum) peuvent être prélevés chez les enfants et recueillis
dans les tubes de prélèvement.
Mélanger immédiatement en retournant doucement le tube
à plusieurs reprises ; un caillot de sang solide se formera en
quelques secondes. Ne pas agiter le tube pendant que le sang
coagule. Les tubes de prélèvement sont compatibles avec le
système Vacutainer® et peuvent être utilisés, si on le désire, avec
les aiguilles spéciales à la place de la seringue.
Veiller à indiquer clairement sur l’étiquette du tube l’identification
correcte du patient.
Décoller le caillot pour lui permettre de se rétracter et laisser
le tube à température ambiante (20 à 25°C) ou à 37°C pendant
30 à 60 minutes jusqu’à ce que quelques gouttes de sérum
puissent être aspirées à l’aide d’une pipette Pasteur. Si on le
désire, le processus de séparation du sérum peut être accéléré
par centrifugation. Le sérum séparé doit ensuite être clarifié par
centrifugation, si nécessaire.
Les tubes de prélèvement contiennent du venin de Bothrops
atrox qui permet d’obtenir une coagulation rapide et complète,
même en présence d’héparine et d’autres antithrombines.16,17
Le sérum clarifié peut être conservé entre 2 et 8°C jusqu’à 1
semaine ou entre -15 et -25°C pour de plus longues périodes
avant de procéder au test.
REMARQUE : Une légère hémolyse de l’échantillon peut être
observée. Celle-ci n’affectera pas la capacité du ThromboWellcotest à détecter les PDF dans l’échantillon et n’entraînera
pas de résultats faussement positifs.
Le sang recueilli sans inhibiteur d’enzyme n’est pas approprié
pour la recherche de PDF.
Echantillons d’urine :
Introduire 2 ml d’urine dans un tube de prélèvement PDF (fourni
avec le kit) étiqueté au nom du patient. Mélanger le contenu
soigneusement en retournant à plusieurs reprises le tube bouché.
Les tubes de prélèvement contiennent du venin de Bothrops
atrox et un inhibiteur d’enzyme. Si on soupçonne la présence de
sang dans l’urine suite à une lésion rénale, laisser reposer le tube
pendant au moins 30 minutes à température ambiante (20 à 25°C)
pour que le matériau coagulable puisse être totalement éliminé.
La présence de l’inhibiteur dans le tube de prélèvement empêche
toute dégradation ultérieure pendant cette période d’incubation.
L’urine contaminée par du sang, notamment du sang menstruel,
peut contenir des PDF sans que cela soit lié à l’état des reins ; de
tels échantillons ne sont pas appropriés pour ce test bien qu’un
résultat négatif soit acceptable dans ces circonstances.
Filtrer l’urine sur un disque de fibre de verre (Whatman GF/B ou
équivalent) ou sur un filtre à membrane (dimension des pores
8 µm ou moins) ; si le test n’est pas urgent, l’urine peut également
être congelée entre -15 et -25°C pendant la nuit, puis décongelée
et centrifugée. Si l’on ne procède pas de cette manière, certains
échantillons d’urine peuvent donner des réactions faussement
positives avec une dilution allant jusqu’à 1/4.
Si les échantillons de sang ou d’urine sont traités de la manière
décrite, aucun autre additif n’est nécessaire pour préserver
l’intégrité de l’échantillon.
La présence de facteur rhumatoïde dans le sérum peut donner
exceptionnellement des résultats faussement positifs lors de tests
ultérieurs des PDF par le Thrombo-Wellcotest et les résultats
obtenus chez les patients présentant les symptôms d’une
polyarthrite rhumatoïde doivent de ce fait être examinés avec
prudence.
Les substances éventuellement présentes dans l’urine, qui
peuvent donner une fausse agglutination, peuvent être éliminées
par l’une des 2 méthodes décrites ci-dessus.
Il est préférable de conserver les échantillons d’urine entre -15
et -25°C jusqu’au test, l’activité PDF restant intacte pendant de
longues périodes. Les échantillons ne doivent pas être recongelés
mais conservés entre 2 et 8°C après décongélation.
6. Procedure
MATERIEL FOURNI :
Le Thrombo-Wellcotest permet la réalisation de 20 tests (voir la
partie Composition du coffret).
PROCEDURE DU TEST
REMARQUE : Tous les tests doivent être effectués à une
température ambiante optimale (20 à 25°C).
Procédure qualitative pour les échantillons de sérum
1.
Vérifier que l’échantillon ne contient ni cellules ni fibrine.
Préparer les dilutions de sérum de la manière suivante :
2.
Prendre 2 petits tubes à essai en verre ou en plastique et
les étiqueter 1 et 2 respectivement. De même, identifier 2
cercles de la lame.
3.
A l’aide du compte-gouttes gradué fourni avec le flacon
de tampon salin glycine, ajouter 0,75 ml du tampon dans
chaque tube.
4.
A l’aide de l’une des pipettes jetables fournies munies de
la poire, ajouter 5 gouttes de l’échantillon de sérum dans
le tube à essai 1 et 1 goutte dans le tube à essai 2.
5.
Mélanger le contenu des 2 tubes qui contiennent
maintenant respectivement des dilutions de sérum au
1/5e et 1/20e environ. Rincer la pipette jetable avec un peu
d’eau ou de solution saline et s’en servir pour transférer 1
goutte du tube 2 dans le cercle 2 de la lame à réaction et 1
goutte du tube 1 dans le cercle 1 (pipeter les liquides dans
cet ordre).
6.
Homogénéiser soigneusement la suspension latex en
agitant vigoureusement le flacon 3 ou 4 fois puis ajouter 1
goutte de la suspension dans chaque cercle de la lame.
7.
Remuer chacun des mélanges sérum/latex, en commençant
par celui du cercle 2. En utilisant l’un des bâtonnets jetables,
étaler chaque mélange de liquide de manière à remplir la
totalité du cercle.
8.
Osciller doucement la lame pendant exactement 2
minutes tout en observant s’il se produit une agglutination
macroscopique. Comme pour toutes les réactions
d’agglutination sur lame, les résultats s’observent mieux à
la lumière du jour mais les agglutinations obtenues avec le
Thrombo-Wellcotest sont franches et peuvent facilement
être reconnaissables dans n’importe quelles conditions
normales d’éclairage. Ne pas utiliser de loupe. Déterminer
la présence ou l’absence d’agglutination immédiatement
après avoir oscillé la lame pendant 2 minutes. Au-delà de
ce délai, des résultats erronés peuvent se produire suite
au dessèchement du mélange sur la lame.
Procédure qualitative pour les échantillons d’urine
1.
Vérifier que l’échantillon ne présente pas de trouble ou de
précipité. Préparer la dilution d’urine de la manière suivante :
2.
Prendre 1 petit tube à essai en verre ou en plastique ; marquer
également 2 cercles des lames 1 et 2 respectivement.
3.
A l’aide du compte-gouttes gradué fourni avec le flacon de
tampon salin glycine, ajouter 0,75 ml du tampon dans le
tube.
4.
A l’aide de l’une des pipettes jetables fournies munies de la
poire, ajouter 4 gouttes de l’échantillon d’urine au tampon
contenu dans le tube à essai puis déposer 1 goutte (d’urine
non diluée) dans le cercle 1 de la lame ; rejeter le reste
d’urine dans le récipient d’origine.
5.
Mélanger le contenu du tube (dilution au 1/5e environ) par
aspirations répétées dans le compte-gouttes jetable, puis
déposer 1 seule goutte de la dilution dans le cercle 2 de la
lame.
6.
Homogénéiser soigneusement la suspension latex en
agitant vigoureusement le flacon 3 ou 4 fois puis ajouter 1
goutte de la suspension dans chaque cercle de la lame.
7.
Remuer chacun des mélanges urine/latex, en commençant
par celui du cercle 2. En utilisant l’un des bâtonnets jetables,
étaler chaque mélange de liquide de manière à remplir la
totalité du cercle.
8.
Osciller doucement la lame pendant exactement 2
minutes tout en observant s’il se produit une agglutination
macroscopique. Comme pour toutes les réactions
d’agglutination sur lame, les résultats s’observent mieux à
la lumière du jour mais les agglutinations obtenues avec le
Thrombo-Wellcotest sont franches et peuvent facilement
être reconnaissables dans n’importe quelles conditions
normales d’éclairage. Ne pas utiliser de loupe. Déterminer
la présence ou l’absence d’agglutination immédiatement
après avoir oscillé la lame pendant 2 minutes. Au-delà de
ce délai, des résultats erronés peuvent se produire suite
au dessèchement du mélange sur la lame.
Du fait de la différence de viscosité entre le sérum et l’urine,
le volume d’1 goutte de sérum est inférieur au volume d’1
goutte d’urine lorsque l’on utilise les pipettes fournies. Les
méthodes de préparation des dilutions au 1/5e de sérum
et d’urine ne sont donc pas identiques.
Procédure semi-quantitative pour les échantillons de sérum
1)
Préparer une dilution au 1/10e de l’échantillon de sérum en
ajoutant 0,1 ml de sérum à 0,9 ml de tampon salin glycine
dans un tube à essai.
2)
Préparer une série de dilution de 2 en 2 du 1/10e au 1/320e
comme suit :–
Tube :
Tampon :
Sérum :
1
0,9 ml
0,1 ml
2
0,5 ml
0,5 ml
Mélanger et
transférer :
3
0,5 ml
0,5 ml
4
0,5 ml
0,5 ml
5
0,5 ml
0,5 ml
6
0,5 ml
0,5 ml
3)
1/320e
Transférer 1 goutte de chaque dilution, en commençant
par la dilution au 1/320e, dans les différents cercles de la
lame de verre.
4)
Homogénéiser soigneusement la suspension latex en
agitant vigoureusement le flacon 3 ou 4 fois puis ajouter 1
goutte de la suspension dans chaque cercle de la lame de
verre.
5)
A l’aide de l’un des bâtonnets jetables, remuer chacun des
mélanges sérum/latex en commençant par la plus forte
dilution.
6)
Osciller doucement la lame pendant exactement 2
minutes tout en observant s’il se produit une agglutination
macroscopique.
7)
Le point de virage est donné par la dernière dilution de
sérum donnant une agglutination franche.
Procédure semi-quantitative pour les échantillons d’urine
1)
Préparer une dilution au 1/2 de l’échantillon d’urine en
ajoutant 0,5 ml d’urine à 0,5 ml de tampon salin glycine
dans un tube à essai.
2)
Préparer une série de dilution de 2 en 2 du 1/2 au 1/64e
comme suit :–
Tube :
Tampon :
Urine :
Mélanger et
transférer :
1
0,5 ml
0,5 ml
2
0,5 ml
0,5 ml
3
0,5 ml
0,5 ml
4
0,5 ml
0,5 ml
5
0,5 ml
0,5 ml
6
0,5 m l
0,5 ml
1/64e
3)
4)
5)
6)
7)
Transférer 1 goutte de chaque dilution, en commençant par
la dilution au 1/64e, dans les différents cercles de la lame
de verre à l’aide de la pipette jetable et de la poire.
Homogénéiser soigneusement la suspension latex en
agitant vigoureusement le flacon 3 ou 4 fois puis ajouter 1
goutte de la suspension dans chaque cercle de la lame de
verre.
A l’aide de l’un des bâtonnets jetables, remuer chacun des
mélanges urine/latex en commençant par la plus forte
dilution.
Osciller doucement la lame pendant exactement 2 minutes
tout en observant s’il se produit une agglutination
macroscopique.
Le point de virage est donné par la dernière dilution d’urine
donnant une agglutination franche.
7. Resultats
Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en
fonction des antécédents médicaux du patient, du tableau
clinique et des autres résultats.
LECTURE DES RESULTATS
Remarque : Toutes les valeurs numériques indiquées ci-après sont
considérées comme approximatives.
Une réaction POSITIVE est indiquée par le développement d’une
agglutination dans les 2 minutes qui suivent l’agitation de la
suspension latex avec l’échantillon, montrant des agrégats nets
des particules de latex (Fig. 2). La vitesse d’apparition et l’intensité
de l’agglutination dépendent de la quantité des antigènes présents
dans l’échantillon ; l’agglutination peut apparaître en quelques
secondes sous forme de gros agrégats ou plus lentement sous
forme d’une agglutination plus fine.
Une réaction NEGATIVE est indiquée par l’absence d’agglutination
du latex et l’apparence laiteuse de la suspension reste inchangée
pendant les 2 minutes du test (Fig. 1). Noter, cependant, que de
faibles traces de granulosités peuvent être détectées sur des
profils négatifs, selon l’acuité visuelle de l’opérateur.
Réaction type
(Fig. 1)
(Fig. 2)
Image non agglutinée Image agglutinée
Résultats qualitatifs
Echantillons de sérum :
Comme le Thrombo-Wellcotest est ajusté à une sensibilité de
2 µg/ml, l’observation d’une agglutination dans l’un ou l’autre des
cercles de la lame indique la présence de PDF à une concentration
finale supérieure ou égale à 2 µg/ml dans la dilution de sérum
de ce cercle. Comme les dilutions des cercles 1 et 2 sont
respectivement au 1/5ème et au 1/20ème environ, un résultat
positif dans le cercle 1 indique que les PDF sont présents dans
le sérum d’origine à une concentration supérieure ou égale à
10 µg/ml alors qu’une agglutination dans le cercle 2 indique une
concentration d’origine supérieure ou égale à 40 µg/ml.
Remarque : Si l’on observe une agglutination dans le cercle 2, il
doit également y en avoir une dans le cercle 1 ; si ce n’est pas le
cas, le test n’a pas été effectué correctement et doit être répété.
Echantillons d’urine :
Comme le Thrombo-Wellcotest est ajusté à une sensibilité de
2 µg/ml, l’observation d’une agglutination dans l’un ou l’autre des
cercles de la lame indique la présence de PDF à une concentration
supérieure ou égale à 2 µg/ml dans la dilution de ce cercle.
Comme l’urine est testée non diluée dans le cercle 1 et à une
dilution au 1/5ème dans le cercle 2, un résultat positif dans le
cercle 1 indique que les PDF sont présents à une concentration
supérieure ou égale à 2 µg/ml alors qu’une agglutination dans le
cercle 2 indique une concentration d’origine supérieure ou égale
à 10 µg/ml.
Remarque : Si l’on observe une agglutination dans le cercle 2, il
doit également y en avoir une dans le cercle 1 ; si ce n’est pas le
cas, le test n’a pas été effectué correctement et doit être répété.
Examples
Echantillon 1 – Sérum
Aspect de la dilution au 1/5ème (cercle 1) – positif.
Aspect de la dilution au 1/20ème (cercle 2) – positif.
La dilution de sérum au 1/20ème contient donc au moins 2 µg/ml
de PDF ; la concentration de PDF est par conséquent supérieure
au égale à 40 µg/ml.
Echantillon 2 – Urine
Aspect sans dilution (cercle 1) – positif.
Aspect de la dilution au 1/5ème (cercle 2) – négatif.
L’urine non diluée possède une concentration supérieure ou
égale à 2 µg/ml de PDF mais moins de 2 µg/ml lorsqu’elle est
diluée au 1/5ème. La concentration de PDF dans l’urine est par
conséquent comprise entre 2 et 10 µg/ml.
Résults semi-quantitatifs
Calcul des Resultats
Les concentrations de PDF dans le sérum et l’urine sont calculées
d’une manière identique en multipliant le point de virage du
titrage de la dilution par un facteur de 2 µg/ml.
Par exemple pour le sérum :
1/10e
+++
1/20e
++
1/40e
+
1/80e
+
1/160e
–
1/320e
–
Concentration de PDF : 80 x 2 = 160 µg/ml (approximativement).
CONTROLE QUALITE
Les réactifs ont une bonne stabilité et il n’est normalement pas
nécessaire d’inclure des sérums témoin positifs ou négatifs avec
chaque série de tests. Cependant, si plusieurs jours ou semaines
se sont écoulés depuis le dernier test, il est prudent de vérifier le
fonctionnement correct du système en testant la suspension latex
avec les sérums témoin fournis avec le kit. Ces sérums ont déjà
été dilués et sont prêts à l’emploi : déposer 1 goutte de chaque
sérum sur la lame et effectuer le test comme décrit ci-dessus à
partir de l’étape 6 de la procédure qualitative. Le témoin positif
doit présenter une agglutination franche tandis que la suspension
latex doit rester inchangée avec le contrôle négatif. Pour plus de
précision dans la procédure semi-quantitative, il est recommandé
d’incorporer une préparation de référence dans chaque test.
INTERPRETATION DES RESULTATS
Les concentrations de PDF mesurées à l’aide du ThromboWellcotest sont en bonne corrélation (r = 0,95) avec les résultats
obtenus par les dosages immunologiques par inhibition de
l’hémagglutination. Les échantillons étudiés comprenaient des
plasmas défibrinés,13 des sérums de patients atteints d’affections
rénales, d’affections hépatiques, de carcinomes, d’hyperthyroïdie,
d’embolies pulmonaires,14 d’affections thromboemboliques ou
d’infarctus du myocarde15 et des urines d’individus normaux et
de patients ayant récemment subi une transplantation rénale.12
L’interprétation des résultats obtenus avec le Thrombo-Wellcotest
est par conséquent la même que pour les résultats obtenus par
les techniques d’IHA.
Concentrations sériques de PDF
Comme la concentration normale moyenne de PDF sériques est
de 4,9 ± 2,8 µg/ml,4 une concentration normale ou légèrement
élevée de l’échantillon donnera un résultat négatif (pas
d’agglutination) aux 2 dilutions utilisées dans la méthode décrite.
Bien qu’une élévation modérée de la concentration de PDF ait
été constatée dans un large éventail de conditions cliniques,
un test de dépistage des PDF sériques peut avoir une utilité
diagnostique dans la coagulation intravasculaire disséminée8 et
les affections vasculaires occlusives aiguës qui sont difficiles à
déceler fiablement par le seul examen clinique.19
La coagulation intravasculaire disséminée (CIVD) s’accompagne
d’une diminution des taux circulants de fibrinogène et de
nombreux facteurs de la coagulation, d’une augmentation du
dépôt de fibrine et d’une élévation des concentrations de PDF
sériques due à une fibrinolyse secondaire.20 Une CIVD peut
s’observer dans des circonstances variées, par exemple en
cas de choc, d’hyperthermie, de dégâts tissulaires étendus,
de morsure de serpent, de complications obstétricales ou
d’hémolyse intravasculaire aiguë incluant des réactions
hémolytiques transfusionnelles.21 La détermination des PDF
circulants parallèlement à d’autres tests de coagulation tels
que la numération plaquettaire, le temps de Quick, la taille et
la stabilité du caillot, etc. peut aider au diagnostic de la CIVD et
à sa différenciation d’un trouble cliniquement semblable mais
beaucoup plus rare, la fibrinogénolyse pathologique.22
L’embolie pulmonaire s’accompagne d’une élévation marquée
des PDF qui atteignent des concentrations dépassant 40 µg/
ml, bien que ces valeurs soient transitoires et puissent passer
inaperçues si l’on ne prélève pas des échantillons de sérum
régulièrement en commençant dès le début de l’épisode
suspect.19 En cas de thrombose veineuse profonde, on observe
normalement des concentrations moyennement élevées
comprises entre 10 et 40 µg/ml, des concentrations allant jusqu’à
100 µg/ml ayant été rapportées dans certains cas de coagulation
massive. En revanche, des études de cas minutieuses réalisées à
l’aide d’une phlébographie et d’une scintigraphie des membres
après injection de 131l-fibrinogène ont montré que les patients
chez qui les résultats cliniques suggèrent une thrombose
veineuse profonde mais non confirmée montrent rarement des
concentrations de PDF supérieures à 10 µg/ml.
L’infarctus du myocarde s’accompagne d’une augmentation des
concentrations de PDF sériques pour atteindre 40 à 160 µg/ml
pendant 1 ou 2 jours après la crise. Après la disparition de ce pic
initial, la surveillance continue des concentrations sériques peut
fournir des indices précoces d’une extension de l’infarctus ou
d’une complication thrombotique secondaire.7 Il est démontré
qu’il existe une relation entre la concentration de PDF sériques
à la phase aiguë et la fréquence des complications observées
ultérieurement.23
Concentrations urinaires de PDF
L’urine contient normalement moins de 0,25 µg/ml de PDF,9
donnant une réaction négative (pas d’agglutination) dans les
2 cercles par la méthode décrite ci-dessus. Chez les malades
atteints d’affections rénales, des concentrations élevées peuvent
être trouvées et des informations cliniques utiles sur le type,
l’activité et la gravité de l’affection10 peuvent être obtenues par
dosage quotidien des PDF sériques24 ou urinaires. L’efficacité de
certains médicaments dans le traitement de la glomérulonéphrite
proliférative peut être contrôlée en suivant l’excrétion de PDF
pendant la période d’administration.25 De même, lors des crises
de rejet après transplantation rénale, la concentration de PDF
peut augmenter rapidement jusqu’à 75 µg/ml.9,15 En surveillant
les PDF urinaires, un début de rejet peut être décelé avant qu’il ne
le soit par d’autres méthodes12 ; la concentration urinaire diminue
rapidement quand un traitement immunosuppresseur efficace est
repris.11 En cas d’infection des voies urinaires, le dosage des PDF
urinaires peut être utile dans le diagnostic du siège de l’infection,
la concentration étant élevée en cas d’infection urinaire haute
alors qu’elle est normale en cas d’infection vésicale.26
8. LIMITES DE LA MÉTHODE
Avec des échantillons de sérum, la présence de facteur rhumatoïde
peut interférer avec le test et donner des résultats faussement
élevés. Si les symptômes d’un patient suggèrent qu’il est atteint
d’une polyarthrite rhumatoïde, il est conseillé de pratiquer un test
de dépistage du facteur rhumatoïde parallèlement au ThromboWellcotest. Si ce test donne un résultat négatif, on peut considérer
la concentration de PDF comme valide ; en revanche, si les 2 tests
sont positifs, la concentration de PDF doit être interprétée avec
prudence.
L’interférence du facteur rhumatoïde peut être éliminée en
réduisant le sérum avec du dithiothréitol ou 2-mercaptoéthanol.18
Certaines substances pouvant être présentes dans l’urine peuvent
provoquer une agglutination non spécifique. Ces substances
interférentes peuvent être éliminées selon la méthode décrite
au paragraphe Prélèvement et conservation des échantillons Echantillons d’urine.
9. RESULTATS ATTENDUS
Le Thrombo-Wellcotest s’agglutine en présence de PDF à une
concentration supérieure ou égale à 2 µg/ml.
10. CaractÉristiQUEs SpÉCIFIQUES
Le Thrombo-Wellcotest permet de déceler le fibrinogène et tous
les antigènes apparentés (monomères de fibrine, fragments X, Y,
D et E) dans le plasma, le sérum et l’urine humaine. La sensibilité
du test est standardisée à 2 µg/ml de PDF, mais la réactivité
vis à vis de la molécule entière de fibrinogène peut varier d’un
lot à l’autre. Si le Thrombo-Wellcotest est utilisé pour d’autres
finalités que le dosage des PDF dans le sérum ou l’urine selon les
procédures décrites dans la notice du dosage, il est recommandé
d’inclure, dans chaque série de tests, une préparation standard
du laboratoire avec le matériel approprié.
11. BIBLIOGRAPHIE
1.
F erri, R.G. and Ferreira, H.C. (1963). Immunochemical studies of
the circulating products of fibrinogenolysis in certain pathological
conditions. Vox Sang. (Basel), 8, 356.
2.
erskey, C., Kleiner, G.J., et al (1966). Quantitative estimation of
M
split products of fibrinogen in human serum, relation to diagnosis and
treatment. Blood, 28, 1.
3.
urkami, M. (1965). An Immunological method for demonstrating
M
fibrin or fibrinogen degradation products in the circulating blood. Acta
haemat. Jap., 28, 341.
4.
as, P.C., Allan, A.G.E., et al (1967). Fibrin degradation products in
D
sera of normal subjects. Brit. Med. J., 4, 718.
5.
ash, J.D. (1966). Effect of moderate exercise on the fibrinolytic
C
system in normal young men and women. Brit. Med. J., 2, 502.
6.
hakrabarti, R., Hocking, E.D., et al (1969). Reaction pattern to three
C
stresses-electoplexy, surgery, and myocardial infarction-of fibrinolysis
and plasma fibrinogen. J. Clin. Path., 22, 659.
7.
ash, J.D., Woodfield, D.G., et al (1969). Diagnosis of suspected or
C
occult pulmonary embolus. Brit. Med. J., 2, 576.
8.
E llman, L., Carvalho, A., et al (1973). The Thrombo-wellcotest as a
screening test for disseminated intravascular coagulation. New Engl.
J. med., 288, 633.
9.
Clarkson, A.R., Morton, J.B., et al (1970). Urinary fibrin/fibrinogen
degradation products after renal homotransplantation. Lancet, 2,
1220.
10. C
larkson, A.R., MacDonald, M.K., et al (1971). Serum and urinary
fibrin/fibrinogen degradation products in glomerulonephritis. Brit.
Med. J., 3, 447.
11. C
ash, J.D. and Clarkson, A.R. (1971). 45. Serum and urinary fibrin/
fibrinogen degradation products in renal disease. Scand. J haemat.,
Suppl. 13, 331.
12. H
ulme, B. and Pitcher, P.M. (1973). Rapid latex-screening test for the
detection of fibrin-fibrinogen degradation products in urine after renal
transplantation. Lancet, 1, 6.
13. A
rocha-Pinango, C.L. (1972). A comparison of the TRCII and latexparticle tests for the titration of FR-antigen. J. Clin. Path. 25, 757.
14. G
arvey, M.B. and Black, J.M. (1972). The detection of fibrinogen/
fibrin degradation products by means of a new antibody-coated latex
particle. J. Clin. Path., 25, 680.
15. P
itcher, P.M. (1972). The detection of fibrinogen degradation products
(FDP) in serum and urine. Canad. J. Med. Tech., 34, 166.
16. B
lombäck, B., Blombäck, M., et al (1957). Coagulation studies on
“Reptilase”, an extract of the venom from Bothrops jararaca. Throm.
et diath. haem, 1, 76.
17. L atallo, Z.S. and Teisseyre, E. (1971). Evaluation of Reptilase R and
thrombin clotting time in the presence of fibrinogen degradation
products and heparin. Scand. J. Haemat., Suppl. 13, 261.
18. R
utstein, J.E., Holahan, J.R., et al (1978). Rhematoid factor
interference with the latex agglutination test for fibrin degradation
products. J. Lab. Clin. Med., 92, 529.
19. R
uckley, C.V., Das, P.C., et al (1970). Serum fibrin/fibrinogen
degradation products associated with postoperative pulmonary
embolus and venous thrombosis. Brit. Med. J., 4, 395.
20. M
erskey, C., Johnson, A.J., et al (1967). The defibrination syndrome:
Clinical features and laboratory diagnosis. Brit. J. Haemat., 13, 528.
21. S ack, E.S. and Nefa, O.M. (1970). Fibrinogen and fibrin degradation
products in Hemolytic transfusion reactions. Transfusion, 10, 317.
22. M
arder, V.J. (1971). Pathophysiology and therapy of disseminated
intravascular coagulation. Rational Drug Therapy, 5/12, 1.
23. B
aele, G., Mussche, M., et al (1972). Serum fibrin/fibrinogen
degradation products in acute myocardial infarction. Lancet, 1, 689.
24. B
riggs, J.D., Prentice, C.R.M., et al (1972). Serum and urine fibrinogenfibrin-related antigen (F.R.-antigen) levels in renal disease. Brit. Med.
J. 4, 82.
25. Clarkson, A.R., MacDonald, M.K., et al (1972). Modification by drugs of
urinary fibrin/fibrinogen degradation products in glomerulonephritis.
Brit. Med. J., 3, 255.
26. Whitworth, J.A., Fairley, K.F., et al (1973). Urinary fibrin-degradation
products and the site of urinary infection. Lancet, 1, 234.
12. EMBALLAGE
HA13/R30852601.....................................................20 tests
Légende des symboles
Référence de catalogue
Dispositif médical de diagnostic in vitro
Consulter le mode d’emploi
Limite de température (température
conservation)
Code de lot (numéro de lot)
de
A utiliser avant (date de péremption)
Avertissement, consulter la documentation jointe
Ne pas réutiliser
Méthode de stérilisation par irradiation
Fabricant
Vacutainer® est une marque commerciale de Becton Dickinson.
*marque commerciale.
IFU X7824 Révisé Janvier 2013
Remel Europe Ltd.
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK
Pour tout support technique, contacter le distributeur local.
">