Roche VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Manuel utilisateur

VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
Guide d’interprétation pour le carcinome
urothélial
ii
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Table des matières
Introduction
1
Utilisation prévue
2
Utilisation prévue du produit
2
Objectif du guide d’interprétation
2
Évaluation clinique
3
Présentation de la coloration
3
Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
pour le carcinome urothélial
4
Déroulement du traitement des échantillons
5
Contrôles
6
Caractéristiques de la coloration - Carcinome urothélial
7
Différentiation de la coloration des IC et de la coloration des TC :
9
Méthode d’évaluation
11
Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils
14
Images de référence
17
Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : évaluation des IC
17
Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : IC < 5 %
18
Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : IC ≥ 5 %
21
Cas difficiles
24
Artefacts de coloration
26
Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA
PD-L1 (SP142) Assay
29
Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
29
Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu
30
Références
31
iii
Introduction
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay est un test immunohistochimique
qui utilise un anticorps primaire monoclonal de lapin anti-PD-L1 pour
reconnaître la protéine-ligand de mort programmée 1 (PD-L1). Ce test
a été mis au point conjointement par Roche/Ventana Medical Systems,
Inc. (Ventana) et Roche/Genentech afin d’identifier les patients atteints
d’un carcinome urothélial localement avancé ou métastatique (mUC)
les plus susceptibles de répondre positivement à un traitement par
TECENTRIQ® (atezolizumab).
Le carcinome urothélial (également appelé carcinome des cellules
urothéliales, carcinome à cellules transitionnelles des voies urinaires
ou cancer urothélial de la vessie) est le cancer du système urinaire
le plus courant dans le monde. La majorité des tumeurs urothéliales
apparaissent dans la vessie. Elles apparaissent plus rarement dans le
pelvis rénal, dans l’urètre ou dans l’uretère. Le carcinome à cellules
transitionnelles (TCC) est le sous-type histologique le plus courant
associé au cancer de la vessie et représente plus de 90 % de tous les
cas de carcinome urothélial dans le monde industrialisé ; les soustypes non urothéliaux (ex. : carcinome épidermoïde, adénocarcinome,
carcinome à petites cellules) sont plus fréquents dans les autres
régions du monde.1
Globalement, on estime à 429 793 le nombre de nouveaux cas de
cancer de la vessie et à 165 084 le nombre de décès en 2012.2 Rien
qu’en Europe, en 2012, on estimait à 151 297 le nombre de nouveaux
cas de cancer de la vessie et à 52 411 le nombre de décès. En 2015,
on estime qu’il y aurait eu 74 000 nouveaux cas de cancer de la vessie
et 16 000 décès aux États-Unis.3 Le carcinome urothélial se présente
sous forme de maladie invasive non musculaire, de maladie invasive
musculaire ou de maladie métastatique. Le taux de survie relatif à cinq
ans des patients atteints d’un mUC est d’environ 5,4 %.4
PD-L1 est une protéine transmembranaire qui réduit les réponses
immunitaires en se liant à ses deux récepteurs, programmed death-1
(PD-1) et B7.1 (Figure 1). PD-1 est un récepteur inhibiteur exprimé sur
les lymphocytes T suite à l’activation de ces derniers, cette activation
perdurant en état de stimulation chronique comme dans les cas
d’infection chronique ou de cancer5. La liaison de PD-L1 et de PD-1
empêche la prolifération des lymphocytes T, la production des cytokines
et l’activité cytolytique, ce qui entraîne l’inactivation fonctionnelle ou
l’épuisement des lymphocytes T. B7.1 est une molécule exprimée sur les
cellules présentatrices d’antigène et sur les lymphocytes T activés. La
liaison de la protéine PD-L1 et du récepteur B7.1 sur les lymphocytes T
et les cellules présentatrices d’antigène peut entraîner une diminution
des réponses immunitaires, y compris l’inhibition de l’activation
des lymphocytes T et la production des cytokines.6 L’expression de
1
Figure 1 : Voie PD-1/PD-L1
PD-L1 sur les cellules immunitaires et tumorales a été observée.
L’expression aberrante de PD-L1 sur les cellules tumorales (TC)
semblerait entraver l’immunité anti-tumorale, résultant en une évasion
immunitaire.5, 7 L’interruption de la voie PD-L1/PD-1 représente donc
une stratégie attrayante pour redynamiser l’immunité des lymphocytes
T spécifiques de la tumeur supprimée par l’expression de PD-L1 dans
le microenvironnement tumoral. Une corrélation entre l’expression
de PD‑L1 dans les TC ou dans les cellules immunitaires infiltrant les
tumeurs (IC) et le bénéfice clinique obtenu avec les inhibiteurs de la
voie PD‑L1/PD-1 a été décrite dans plusieurs types de cancers.7-13
L’atezolizumab est un anticorps monoclonal humanisé présentant
une région Fc qui se lie à PD-L1 et bloque les interactions avec les
récepteurs PD-1 et B7.1. L’atezolizumab est une immunoglobuline
kappa IgG1 non glycosylée dont la masse moléculaire calculée est de
145 kDa.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Utilisation prévue
Utilisation prévue du produit
Objectif du guide d’interprétation
Consulter la notice du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour une
description détaillée de l’utilisation prévue de ce produit.
Le guide d’interprétation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay est
destiné à aider les anatomopathologistes à interpréter et à évaluer les
tissus de carcinome urothélial colorés avec le test VENTANA PD-L1
(SP142) Assay.
Remarque : L’utilisation de ce diagnostic avec les traitements indiqués
peut ne pas être autorisée dans tous les pays. Consultez votre
représentant local Roche pour les autorisations locales.
• Les photographies incluses dans ce guide de formation illustrent les
profils de coloration, ainsi que la portée de l’expression de PD-L1,
qui peuvent être présents dans les tissus de carcinome urothélial
colorés avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.
• L’utilisation des amygdales comme tissu de contrôle dans le
contexte de l’évaluation de PD-L1, ainsi que les caractéristiques et
performances de coloration correspondantes sont traitées.
• Les cas difficiles, les artéfacts de coloration et l’impact des
conditions pré-analytiques sur le test sont également abordés.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
2
Évaluation clinique
Présentation de la coloration
Le test de coloration immunohistochimique (IHC) VENTANA PD-L1
(SP142) Assay génère une coloration sur les IC (Figure 2) ainsi que
sur les TC (Figure 3). Les caractéristiques détaillées de la coloration
sont décrites à la section « Caractéristiques de la coloration pour le
carcinome urothélial ».
H&E 10X
PD-L1 10X
Figure 2 : Tissu de carcinome urothélial présentant une coloration punctiforme et linéaire marron foncé des IC.
H&E 20X
PD-L1 20X
Coloration des IC
Coloration des TC
Figure 3 : Tissu de carcinome urothélial présentant une forte coloration membranaire circonférentielle des TC ainsi qu'une coloration des IC.
3
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le carcinome urothélial
Un tissu de carcinome urothélial coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sera évalué selon les critères indiqués dans le Tableau 1. Les
cellules immunitaires infiltrant la tumeur (IC) sont évaluées en fonction du pourcentage de la zone tumorale occupée par des IC présentant une
coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Si l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans des cellules
immunitaires infiltrant la tumeur occupant ≥ 5 % de la zone tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 5 %. Si
l’échantillon présente une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, dans des cellules immunitaires infiltrant la tumeur couvrant < 5 % de
la zone tumorale, le cas se verra attribuer un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %.
Les échantillons de tissu de carcinome urothélial obtenus par résection, par résection transurétrale de tumeur de la vessie (TURBT) et par biopsie
au trocart sur des sites primaires et métastatiques sont acceptables. Ce test n’a pas été validé pour une utilisation avec des échantillons de
cytologie ou des échantillons d’os décalcifiés. Un tissu de carcinome urothélial est considéré comme adéquat pour une évaluation avec le test
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay s’il contient au moins 50 cellules tumorales viables et le stroma associé. La coloration nécessite trois coupes de
chaque cas, une première coupe de tissu sériée pour la coloration H&E (hématoxyline et éosine), une deuxième pour la coloration avec le réactif
de contrôle négatif et une troisième pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Un échantillon de tissu amygdalien bénin
préqualifié doit être utilisé comme tissu de contrôle positif et négatif pour chaque cycle de coloration. Des instructions détaillées concernant les
critères de qualification et l’acceptabilité du tissu de contrôle sont fournies dans le Tableau 2. Le tissu du patient doit être coloré avec un réactif
de contrôle négatif afin d’évaluer la coloration de fond non spécifique.
Tableau 1 : Algorithme d’évaluation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay pour le carcinome urothélial
Coloration des cellules immunitaires infiltrant la tumeur (IC)
Expression de
PD-L1
Absence de coloration visible de PD-L1 (OU)
Présence d’une coloration visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, sur une quantité de cellules immunitaires infiltrant la tumeur couvrant
< 5 % de la zone tumorale occupée par des cellules tumorales, du stroma intratumoral associé et du stroma péritumoral contigu
IC < 5 %
Présence d’une coloration visible de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité, sur une quantité de cellules immunitaires infiltrant la tumeur couvrant
≥ 5 % de la zone tumorale occupée par des cellules tumorales, du stroma intratumoral associé et du stroma péritumoral contigu
IC ≥ 5 %
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
4
Déroulement du traitement des échantillons
Un échantillon de tissu de
carcinome urothélial est fixé
dans du formol neutre tamponné
à 10 % pendant 6 à 72 heures,
traité, puis inclus en paraffine
conformément aux procédures
de laboratoire standard.
Les coupes de 4 μm d’épaisseur
sont placées sur des lames de
verre chargées positivement.
(Trois coupes sériées sont
nécessaires)
Adéquation de l’échantillon : au moins
50 cellules tumorales viables avec le stroma
associé
La coloration H&E est effectuée.
La lame H&E estelle acceptable ?
Carcinome urothélial
H&E
Non
Oui
Répétition de la
coloration*
Répétition de la
coloration*
Une coupe est colorée avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.
Une coupe est colorée avec l’anticorps Rabbit Monoclonal Negative
Control Ig (Negative Reagent Control, NRC).
Un échantillon de tissu amygdalien est utilisé comme tissu de
contrôle positif et négatif.
Non
La lame de
contrôle portant
l’échantillon de
tissu amygdalien
est-elle
acceptable ?
Tissu amygdalien, IHC
Oui
Répétition de la
coloration*
Non
La lame NRC estelle acceptable ?
Carcinome urothélial,
NRC
Oui
Répétition de la
coloration*
Non
La lame IHC PD-L1
est-elle acceptable ?
*La répétition peut être effectuée sur le même tissu ou sur un autre échantillon de
tissu du patient, selon le cas.
(Toutes les images du carcinome urothélial sont obtenues avec un grossissement 1x.
Les images du tissu amygdalien sont obtenues avec un grossissement 4x.)
5
Oui
Carcinome urothélial
IHC
Statut de PD-L1 relevé par un anatomopathologiste
expérimenté
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Contrôles
Les tissus de contrôle doivent être utilisés uniquement pour vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments
sont correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients. Il est recommandé d’utiliser un
tissu de contrôle pour chaque cycle de coloration (les contrôles sur lame sont acceptables).
Le tissu amygdalien humain bénin est un tissu de contrôle idéal car il contient des cellules immunitaires et épithéliales à coloration positive et
négative et peut servir de tissu de contrôle positif et négatif pour la coloration avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Le tissu amygdalien
coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay affiche une coloration des lymphocytes et des macrophages situés dans les centres germinaux,
avec des cellules immunitaires colorées pour PD-L1dispersées parmi les cellules PD-L1-négatives situées dans les régions interfolliculaires. En
outre, une coloration membranaire diffuse est observée dans les cellules épithéliales cryptiques réticulées avec une absence de coloration des
cellules épithéliales pavimenteuses superficielles.
Le tissu amygdalien fixé dans du NBF à 10 % et traité de la même manière que les tissus du patient doit être qualifié et utilisé comme tissu de
contrôle. Le tissu amygdalien de contrôle doit présenter une coloration acceptable pour qu’un essai soit jugé concluant. Si le tissu amygdalien
ne présente pas une coloration acceptable, le test est considéré comme non valide et doit être répété en incluant des échantillons du patient. Les
critères de qualification et d’acceptabilité applicables aux tissus amygdaliens de contrôle sont indiqués dans le Tableau 2.
Tableau 2 : Critères de qualification et d’acceptabilité des tissus amygdaliens
Acceptable
Inacceptable
Éléments tissulaires négatifs : cellules immunitaires négatives pour PD-L1
dans les régions interfolliculaires avec épithélium pavimenteux superficiel
négatif.
Coloration de fond non spécifique excessive gênant
l’identification des cellules positives pour PD-L1.
Éléments tissulaires positifs : coloration modérée à forte de PD-L1 observée
dans les lymphocytes et les macrophages situés dans les centres germinaux, avec
coloration diffuse dans les cellules d’épithélium réticulé des cryptes.
Coloration inexistante à faible du PD-L1 observée dans les lymphocytes et
dans les macrophages situés dans les centres germinaux ainsi que dans les
cellules d’épithélium réticulé des cryptes.
PD-L1 20X
PD-L1 4X
Épithélium pavimenteux
superficiel
Coloration de fond non
spécifique
PD-L1 20X
PD-L1 20X
Épithélium cryptique
Faible coloration dans les lymphocytes, les
macrophages et les cellules épithéliales
Région
interfolliculaire
Centre germinal
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
6
Caractéristiques de la coloration - Carcinome
urothélial
L’utilisation du test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay sur des tissus
de carcinome urothélial pour immunomarquer PD-L1 génère
une coloration des IC (Figures 4 à 7) et des TC. Les images de
ce guide d’interprétation sont des clichés de lames numérisées.
L’agrandissement utilisé est indiqué pour chaque image.
Coloration des IC :
Les IC sont les cellules immunitaires présentes dans le stroma
intratumoral et dans le stroma péritumoral contigu. La coloration avec
le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay met en évidence une population
hétérogène de cellules immunitaires. La majorité de ces cellules est
morphologiquement similaire aux lymphocytes, aux macrophages, aux
cellules dendritiques et aux granulocytes.
H&E 20X
PD-L1 20X
Stroma intratumoral
avec coloration
punctiforme des IC
Figure 4 : Les IC présentent souvent une coloration punctiforme ou linéaire marron foncé qui constitue le profil de coloration des IC prédominant
dans la majorité des tissus. La coloration des IC est souvent observée sous forme d’agrégats présents soit dans le stroma intratumoral, soit dans le
stroma péritumoral (marge invasive), soit aux deux emplacements.
7
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
PD-L1 20X
H&E 20X
IC diffusées sous
forme de cellules
isolées
H&E 10X
PD-L1 10X
Diffusion des IC sous forme de
cellules isolées en association
avec des agrégats
Figure 5 : Une coloration des IC peut parfois également être observée sous forme de cellules isolées à répartition focale ou diffuse ou de petits
agrégats dispersés (diffusion de cellules isolées) parmi les cellules tumorales. Ce profil peut être observé en association avec des agrégats dans le
stroma tumoral. La coloration des IC correspond aux cellules immunitaires situées parmi les cellules tumorales dans l’image H&E.
H&E 40X
PD-L1 40X
Coloration
circonférentielle
des IC
Figure 6 : Parfois, une coloration membranaire circonférentielle de cellules immunitaires est également observée, notamment sur des cellules
morphologiquement similaires aux macrophages et/ou aux cellules dendritiques.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
8
H&E 20X
PD-L1 20X
Neutrophiles
Figure 7 : Dans de rares cas, une coloration des IC peut être observée dans les neutrophiles sous forme de coloration punctiforme fine couplée
à une coloration granulaire diffuse. La coloration des neutrophiles peut être dispersée parmi les cellules tumorales, dans le stroma intratumoral ou
péritumoral, ou sous forme d’agrégats.
Différentiation de la coloration des IC et de la coloration
des TC :
Une coloration des IC peut être observée en association avec une
coloration des TC. La lame colorée de PD-L1 ne servira qu’à évaluer
les IC ; il est donc essentiel de distinguer la coloration des IC de
la coloration des TC. Un examen de la lame H&E correspondante
aidera à distinguer les IC des TC. Associé à un examen sous fort
H&E 20X
grossissement de la lame colorée de PD-L1, cet examen peut aider
à distinguer la coloration des IC de la coloration des TC. Les images
suivantes représentent différents profils couramment observés dans la
pratique clinique, lorsque la coloration des IC et des TC sont observées
simultanément (Figures 8 à 10).
Forte coloration des TC
PD-L1 20X
Agrégat d’IC
dans le stroma
Figure 8 : Les TC présentent une forte coloration membranaire, avec de rares IC identifiables parmi les TC sur la lame H&E ; se concentrer sur
l’évaluation de la coloration des IC dans le stroma intratumoral et dans le stroma péritumoral contigu.
9
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
H&E 20X
PD-L1 20X
IC diffusées sous forme
de cellules isolées
Nombreuses IC parmi
les TC sur la coloration
H&E
Coloration faible à
modérée des TC
Figure 9: Les TC présentent une coloration membranaire faible à modérée avec de nombreuses IC identifiables parmi les TC sur la lame H&E ; se
concentrer sur l’évaluation des IC présentes parmi les cellules tumorales et dans le stroma.
H&E 20X
PD-L1 20X
Coloration granulaire des TC
H&E 20X
PD-L1 20X
Coloration granulaire
des TC
TC apoptotiques
Figure 10 : Si la lame H&E ne présente que peu d’IC identifiables et qu’un profil de coloration granulaire ou perlé est observé parmi les TC, alors
cette coloration doit être attribuée aux TC plutôt qu’aux IC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
10
Méthode d’évaluation
Le tissu de carcinome urothélial coloré avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay ne sera utilisé que pour évaluer la coloration des IC.
Évaluation des IC : les IC sont évaluées en fonction du pourcentage de la zone tumorale occupé par des cellules immunitaires
présentant une coloration de PD-L1, quelle qu’en soit l’intensité. Toute coloration des IC, quel que soit le type de cellules ou leur
emplacement, est incluse.
• Zone tumorale : la zone tumorale pour l’interprétation du test PD-L1 (SP142) est définie comme la surface occupée par des cellules tumorales
viables, le stroma intratumoral associé et le stroma péritumoral contigu associés (Figure 11A, échantillon prélevé par résection : Figures 11B
et 11C, TURBT : Figure 11D et 11E). Les tumeurs nécrotiques sont exclues de cette définition de la zone tumorale (Figure 11F).
• Dans les échantillons de tissu fragmentés, y compris les résections transurétrales de tumeurs de vessie (TURBT) et les biopsies, où la distinction
entre le stroma intratumoral et le stroma péritumoral est difficile, seul le stroma contigu aux différents foyers tumoraux est inclus dans la
définition de la zone tumorale ; le stroma qui fait partie du fragment de tissu, mais qui n’est pas contigu à une tumeur viable, en est exclus
(Figures 11B et 11C).
A
H&E 4X
B
Zone tumorale
C
Zone tumorale
H&E 1X
Zone tumorale
Stroma intratumoral
PD-L1 1X
Cellules tumorales
Stroma péritumoral
contigu
D
H&E 1X
E
PD-L1 1X
B
Zone tumorale
Zone tumorale
F
H&E 1X
XXXX
Nécrose - exclue de
la zone tumorale
Figure 11 : A Zone tumorale ; B et C Zone tumorale dans un échantillon prélevé par résection ; D et E Zone tumorale dans un échantillon de
résection transurétrale de tumeur de la vessie (TURBT) ; F Zone tumorale dans un échantillon présentant une nécrose.
11
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Évaluation de la coloration de PD-L1 d’agrégats d’IC :
H&E 2X
Examiner la lame colorée par
H&E afin d’y déceler la présence
d’une tumeur, d’une nécrose,
de déterminer l’adéquation de
l’échantillon (au moins 50 cellules
tumorales viables avec le stroma
associé) et d’évaluer de la zone
tumorale.
Seule une coloration des IC
est observée
PD-L1 10X
Examiner la lame colorée pour PDL1 sous un agrandissement de 10x
ou 20x et confirmer que le profil de
coloration global correspond aux
IC, aux TC ou aux deux.
PD-L1 2X
Zone tumorale
Entourer visuellement les agrégats
d’IC aussi précisément que possible
sous un agrandissement de
2x ou 4x.
Agrégats d’IC
Combiner la coloration des
agrégats et estimer le pourcentage
de la zone tumorale occupé par
les agrégats d’IC en utilisant un
agrandissement de 2x ou 4x. Le
résultat de l’évaluation des IC pour
ce cas est ≥ 5 %. Les images de
référence de la section Images de
référence doivent être utilisées
comme aide à l’évaluation.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
PD-L1 2X
12
Évaluation de la coloration de cellules isolées de PD-L1 IC :
Les IC présentes sous forme de cellules isolées sont évaluées sur la
base de la densité de la diffusion sous forme de cellules isolées, en
utilisant les images de référence fournies dans ce guide.
PD-L1 10X
La densité cellulaire des IC diffusées sous forme
de cellules isolées est < 5 %
13
PD-L1 10X
La densité cellulaire des IC diffusées sous
forme de cellules isolées est ≥ 5 %
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Méthodes d’évaluation : difficultés et écueils
1. Zone tumorale dans un carcinome urothélial papillaire : dans les échantillons contenant un carcinome urothélial papillaire, le stroma
dans les axes fibrovasculaires est considéré comme étant le stroma intratumoral. La lamina propria à la base de la lésion papillaire peut contenir
des agrégats lymphoïdes qui présentent une coloration de PD‑L1. Seule la coloration contiguë à la base de la tumeur est considérée comme
faisant partie de la zone tumorale (Figure 12).
H&E 4X
PD-L1 4X
Agrégats
lymphoïdes dans la
lamina propria
Agrégats lymphoïdes
dans la lamina propria
Zone tumorale
Zone tumorale
Figure 12 : En cas de carcinome urothélial papillaire, les agrégats lymphoïdes présents dans la lamina propria sont exclus de l’évaluation des IC.
2. Cellules immunitaires intravasculaires : le système vasculaire du stroma tumoral peut présenter des cellules immunitaires positives pour
PD-L1 (Figure 13). On observe ceci le plus souvent dans les axes fibrovasculaires du carcinome urothélial papillaire. Elles ne doivent pas être
prises en compte pour l’évaluation des IC.
H&E 10X
PD-L1 10X
Coloration des IC intravasculaires exclue de l’évaluation des IC
Figure 13 : Coloration des cellules immunitaires intravasculaires : cellules exclues de l’évaluation des IC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
14
3. Coloration sur les granulomes : certains tissus de carcinome urothélial peuvent présenter des granulomes probablement dus à l’effet du
traitement. Une coloration de PD‑L1 peut être observée sur les macrophages et les cellules géantes de ces granulomes et peut être confondue
avec une coloration des cellules tumorales (Figure 14). Un examen de la lame H&E correspondante facilitera l’identification de la coloration des
cellules immunitaires. Si ces granulomes sont présents dans la zone tumorale, ils doivent être inclus dans l’évaluation des IC.
H&E 10X
PD-L1 10X
Coloration sur un
granulome situé
à l’intérieur de la
zone tumorale
Figure 14 : Coloration sur un granulome : envisager de l’inclure dans l’évaluation des IC s’il se trouve à l’intérieur de la zone tumorale
4. Coloration sur des débris nécrotiques : les débris nécrotiques ou les cellules immunitaires situées en périphérie des régions nécrotiques
ou apoptotiques peuvent présenter une coloration de PD-L1. Cette coloration peut être granulaire et être confondue avec la coloration des IC.
Cette coloration, ainsi que la coloration observée sur des agrégats de neutrophiles, doivent être exclues de l’évaluation (Figure 15).
H&E 20X
PD-L1 20X
Coloration dans les
débris nécrotiques
Figure 15 : Débris nécrotiques présentant une coloration de PD-L1. Ils ne doivent pas être inclus dans l’évaluation des IC. Noter la présence d’une
coloration des TC, qui n’est pas évaluée.
15
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
5. Métastase au niveau d’un ganglion lymphatique : le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut être utilisé pour tester des échantillons
primaires et des échantillons métastatiques. Les échantillons métastatiques peuvent provenir de différents organes, parmi lesquels les ganglions
lymphatiques, le foie, la glande surrénale, les os et les tissus mous. Les métastases osseuses ne conviennent pas pour la coloration avec le test
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Les métastases des ganglions lymphatiques méritent une attention particulière, compte tenu de la présence de
cellules immunitaires natives qui présentent une coloration de PD-L1. Dans les tumeurs qui se sont métastasées dans les ganglions lymphatiques,
seule la coloration des infiltrats de cellules immunitaires contiguë aux cellules tumorales doit être prise en compte pour déterminer le pourcentage
d’IC présentant une coloration de PD-L1 (Figure 16).
H&E 2X
PD-L1 2X
H&E 10X
PD-L1 10X
Figure 16 : A et B : Ganglion lymphatique avec métastases aux contours bien délimités. C et D : Ganglion lymphatique avec multiples petits
foyers de cellules tumorales. La zone tumorale est contournée sur les images H&E et PD-L1.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
16
Images de référence
Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : évaluation des IC
Toutes les images sont grossies 10x
IC diffusées sous forme de cellules isolées
Agrégats d’IC
IC < 5 %
IC ≥ 5 %
Tableau 3 : Caractéristiques des cellules immunitaires (IC) infiltrant la tumeur
Types de cellules présentant une coloration
Lymphocytes, macrophages, cellules dendritiques et granulocytes
Types de cellules inclus dans l’évaluation
Lymphocytes, macrophages, cellules dendritiques et granulocytes
Profil
Agrégats dans le stroma, cellules isolées parmi des cellules tumorales avec coloration punctiforme, linéaire ou
circonférentielle
Dénominateur pour l’évaluation
Zone tumorale
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : IC < 5 %
H&E 1X
PD-L1 1X
A
B
B
A
PD-L1 4X
A
B
PD-L1 4X
Cas 1 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %. Score : IC : < 1 % ; TC : 0 %. Sous un faible grossissement, ce cas
présente plusieurs régions présentant une coloration marron. Examinée sous un fort grossissement, la majeure partie de la coloration marron
semble due à des produits réactionnels (colorants) piégés sous le tissu replié (piégeage de colorants). Il est important de faire la distinction entre
un piégeage de colorant (Région A) et une coloration spécifique des IC (Région B).
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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PD-L1 1X
H&E 1X
A
A
A
PD-L1 2X
A
PD-L1 4X
A
PD-L1 10X
Cas 2 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %. Scores : IC : 1 % ; TC : 0 %. Noter la présence d’une coloration de
PD-L1 dans les IC sur des foyers d’IC isolées, qui, une fois normalisée à l’intégralité de la zone tumorale, est < 5 %.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
H&E 1X
A
A
PD-L1 4X
A
A
PD-L1 1X
PD-L1 10X
Cas 3 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %. Scores : IC 3 % ; TC : 0 %. Il s’agit d’un carcinome urothélial
papillaire présentant plusieurs agrégats lymphoïdes dans la lamina propria. Seuls les agrégats lymphoïdes contigus à la base de la tumeur sont
inclus pour l’évaluation des IC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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Test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay : IC ≥ 5 %
PD-L1 1X
H&E 1X
A
A
B
A
B
PD-L1 4X
B
PD-L1 10X
B
PD-L1 20X
Cas 4 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 5 %. Scores : IC : 10 % ; TC : 90 %. Ce cas illustre une coloration des IC
ainsi qu’une coloration des TC. Sous faible grossissement, il est difficile de distinguer ces 2 types de cellules. En revanche, examinée sous un fort
grossissement (10x), la coloration punctiforme des IC se distingue clairement de la coloration circonférentielle des TC. Ce cas illustre l’importance
d’un examen sous fort grossissement afin de distinguer la coloration des infiltrats de cellules immunitaires de la coloration des cellules tumorales.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
H&E 1X
A
A
A
PD-L1 4X
B
PD-L1 1X
PD-L1 10X
B
Cas 5 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 5 %. Scores : IC : 5 % ; TC : 0 %. Noter la présence d’une coloration sur un
agrégat d’IC.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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H&E 1X
PD-L1 1X
A
A
A
PD-L1 4X
A
PD-L1 10X
Cas 6 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC ≥ 5 %. Scores : IC : 20 % ; TC : 0 %. Noter la présence d’agrégats d’IC ainsi
que de foyers de cellules isolées.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Cas difficiles
H&E 1X
C
B
A
A
PD-L1 10X
PD-L1 1X
C
B
B
PD-L1 10X
C
A
PD-L1 10X
Cas 7 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %. Scores : IC : 3 % ; TC : 5 %. Noter la présence d’une coloration
granulaire des TC ainsi que d’une coloration punctiforme des IC. Noter également la distribution focale de la coloration des TC et des IC. Sous
un fort grossissement, la Région A présente une prédominance de la coloration des TC. La Région B, quant à elle, présente une coloration
des IC et une coloration des TC équivalentes. La Région C présente une coloration faible des deux types cellulaires. Observée sous un faible
grossissement, la coloration des IC se concentre sur un bord de la tumeur (Régions A et B). Le résultat de ce cas est < 5 % (IC : 3 %). Ce cas
illustre l’importance d’un examen sous fort grossissement afin de distinguer la coloration des IC et la coloration des TC, ainsi que l’hétérogénéité
de la coloration.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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H&E 0.5X
PD-L1 0.5X
A
A
B
B
A
PD-L1 4X
Zone tumorale
A
PD-L1 10X
Zone tumorale
B
PD-L1 4X
Zone tumorale
Cas 8 : Le résultat de ce cas est un niveau d’expression de PD-L1 de IC < 5 %. Scores : IC : 2 % ; TC : 0 %. Noter la présence d’un carcinome
urothélial papillaire dans un échantillon prélevé par résection transurétrale de tumeur de la vessie (TURBT). On voit clairement dans les Régions
A et B des agrégats lymphoïdes dans la lamina propria qui ne sont pas contigus à la tumeur et peuvent être inclus par erreur dans l’évaluation des
IC. La ligne définit le contour de la zone tumorale.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Artefacts de coloration
Les artéfacts signalés dans cette section peuvent être observés sur les lames colorées avec le Negative Reagent Control et sur les lames colorées
avec le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. La présence de ces artéfacts peut nécessiter la répétition de la coloration s’ils interfèrent avec
l’interprétation de la coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Toujours examiner la lame Negative Reagent Control correspondante afin
de vérifier que la coloration de fond non spécifique se situe dans les limites acceptables.
PD-L1 2X
PD-L1 2X
Taches non
colorées
Taches non colorées : les taches non colorées sont des zones faiblement ou non colorées généralement circulaires dues à une bulle statique
qui s’est formée pendant la procédure de coloration. L’image de gauche représente un exemple d’une tache non colorée comparée à la coloration
appropriée représentée sur l’image de droite. Si la tache non colorée interfère avec l’interprétation de la lame colorée pour PD-L1, un nouveau
cycle de coloration peut être nécessaire.
PD-L1 20X
NRC 20x
Mouchetage
Coloration spécifique
de PD-L1 dans les IC
Mouchetage : le mouchetage, représenté sur l’image de gauche, est une coloration non spécifique faible à modérée, qui apparaît sous la forme
d’un précipité granulaire fin réparti uniformément et qui se forme le plus souvent dans le cytoplasme. Le mouchetage n’est pas conforme aux
caractéristiques de coloration des IC ou des TC. Cet artéfact ne doit pas être confondu avec une coloration spécifique telle que représentée sur
l’image de droite.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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PD-L1 20X
PD-L1 20X
Taches de DAB : les taches de DAB sont des taches circulaires qui peuvent se former en raison de DAB piégée sous la coupe tissulaire pendant
la procédure de coloration. Si cet artéfact interfère avec l’interprétation de la lame colorée pour PD-L1, répéter la coloration avec des lames non
colorées fraîches. Sur l’image de droite, la tache de DAB n’est pas présente sur la nouvelle coloration réalisée sur une coupe sériée.
NRC 10X
NRC 10X
Débris luminaux : le tissu amygdalien coloré à l’aide du VENTANA PD-L1 (SP142) Assay peut servir à la fois de tissu de contrôle positif et négatif
en raison de la présence d’éléments positifs et négatifs pour la coloration. Une coloration luminale due à une réactivité croisée avec un antigène
inconnu peut être observée sur l’image de tissu amygdalien coloré avec le NRC à gauche. Un exemple approprié de tissu amygdalien coloré avec
le NRC est représenté à droite. Si vous choisissez d’utiliser le NRC sur un tissu de contrôle amygdalien et que des débris luminaux sont observés,
l’échantillon ne devrait pas être utilisé comme tissu de contrôle.
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VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
NRC 10X
PD-L1 10X
Points de DAB
Coloration spécifique
de PD-L1 dans les IC
Points de DAB : une coloration de fond punctiforme non spécifique peut être observée sur du tissu de n’importe quel échantillon. Il s’agit de
petits artéfacts de colorations aléatoires générés par le processus d’amplification du système de détection. Par rapport à la coloration de PD-L1
des IC, les points de DAB sont plus petits et présentent une morphologie différente et plus nette que la coloration punctiforme des IC. La coloration
attendue des cellules immunitaires est visible sur l’image de droite.
NRC 4X
PD-L1 4X
Bruit de fond sérique
Coloration spécifique
de PD-L1 dans les IC
Bruit de fond sérique : le bruit de fond sérique est une coloration non spécifique qui se produit dans les espaces vasculaires et dans les
extravasations de sérum. Ce bruit de fond peut être observé en bas de chacune des images ci-dessus. Il ne doit pas être confondu avec une
coloration spécifique de PD-L1 sur les IC comme illustrée sur l’image de droite.
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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Impact des conditions pré-analytiques sur le test VENTANA PD-L1 (SP142) Assay
Conditions de fixation acceptables pour obtenir des résultats de coloration optimaux avec le test VENTANA PD-L1
(SP142) Assay
• Ventana recommande d’effectuer la fixation pendant 6 à 72 heures dans du NBF à 10 %.
• Le formol zinc permet d’obtenir une coloration comparable à celle obtenue avec le NBF à 10 %.
• La fixation pendant moins de 6 heures n’est pas recommandée.
• Les échantillons fixés avec du Z-5 présentent une coloration non comparable à celle obtenue avec les échantillons fixés avec du NBF à 10 %. La
fixation au Z-5 n’est pas recommandée.
• Le PREFER (Anatech, Ltd.) et les fixateurs à l’alcool, y compris l’AFA (coloration plus faible) ne sont pas recommandés.
Tableau 4 : Coloration avec le VENTANA PD-L1 (SP142) Assay d’un tissu amygdalien avec différents fixateurs et pendant différents
temps de fixation
Temps
de
fixation
(en
heures)
Fixateur
NBF à 10 %
Formol zinc
Z-5*
PREFER*
(Anatech, Ltd.)
AFA*
Alcool à 95 %*
1*
6
12
24
72
Recommandé
*Non recommandé
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(toutes les images sont grossies 20x)
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
Stabilité de l’antigène sur des coupes de tissu
Les coupes de carcinome urothélial (lames non colorées) doivent être
colorées dans les 3 mois qui suivent la coupe et les tissus amygdaliens
humains doivent être colorés dans les 2 mois qui suivent la coupe.
Passé ce délai, les coupes de tissu (lames non colorées) conservées à
température ambiante présentent une perte de coloration importante
(Figure 18).
A
PD-L1 4X
Jour 0
B
PD-L1 4X
Après 3 mois
Figure 18 : Coupes sériées de tissu de carcinome urothélial colorées lors du jour 0 (A) et après trois mois de conservation à température ambiante (B).
VENTANA PD-L1 (SP142) Assay - Guide d’interprétation pour le carcinome urothélial
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Références
1.
Chalasani V, Chin JL, Izawa JI. Histologic variants of urothelial
bladder cancer and nonurothelial histology in bladder cancer.
Can Urol Assoc J. 2009;3(6 Suppl 4):S193-198.
2.
Ferlay J, Soerjomataram I, Ervik M, et al. GLOBOCAN 2012 v1.0.
Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No.
11. http://globocan.iarc.fr. Published 2013-12-12. Updated
2014-01-09. Accessed 2014-02-02.
3.
American Cancer Society. Cancer Facts & Figures 2015. Atlanta:
American Cancer Society; 2015.
4.
Howlader N, Noone AM, Krapcho M, et al. (eds). SEER Cancer
Statistics Review (CSR),1975-2012. National Cancer Institute.
http://seer.cancer.gov/csr/1975_2012/. Published 2015-04-23.
Updated 2015-11-18. Accessed 2016-02-22.
5.
Blank C, Mackensen A. Contribution of the PD-L1/PD-1 pathway
to T-cell exhaustion: an update on implications for chronic
infections and tumor evasion. Cancer Immunol Immunother.
2007;56(5):739-745.
6.
Butte MJ, Keir ME, Phamduy TB, et al. Programmed death-1 ligand
1 interacts specifically with the B7-1 costimulatory molecule to
inhibit T cell responses. Immunity. 2007;27(1):111-122.
7.
Herbst RS, Soria JC, Kowanetz M, et al. Predictive correlates of
response to the anti-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer
patients. Nature. 2014;515(7528):563-567.
8.
Bellmunt J, Mullane SA, Werner L, et al. Association of PD-L1
expression on tumor-infiltrating mononuclear cells and overall
survival in patients with urothelial carcinoma. Ann Oncol.
2015;26(4):812-817.
9.
Brahmer JR, Drake CG, Wollner I, et al. Phase I study of singleagent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory
solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and
immunologic correlates. J Clin Oncol. 2010;28(19):3167-3175.
13. Topalian SL, Hodi FS, Brahmer JR, et al. Safety, activity, and
immune correlates of anti-PD-1 antibody in cancer. N Engl J Med.
2012;366(26):2443-2454.
10. Fehrenbacher L, Spira A, Ballinger M et al. Atezolizumab versus
docetaxel for patients with previously treated non-small-cell lung
cancer (POPLAR): a multicentre, open-label, phase 2 randomised
controlled trial. Lancet. 2016;387(10030):1837-1846.
11. Powles T, Eder JP, Fine GD, et al. MPDL3280A (anti-PD-L1)
treatment leads to clinical activity in metastatic bladder cancer.
Nature. 2014;515(7528):558-562.
12. Rosenberg JE, Hoffman-Censits J, Powles T, et al. Atezolizumab
in patients with locally advanced and metastatic urothelial
carcinoma who have progressed following treatment with
platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2
trial. Lancet. 2016;387(10031):1909–20.
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2020-07-29
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