Roche Staining Colorectal Tissue for VENTANA MMR IHC Panel (OUS) Manuel utilisateur

VENTANA MMR IHC Panel
Guide d’interprétation de la coloration de tissu colorectal
VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody
VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody
VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody
VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody
Table des matières
Introduction ........................................................................................................................................................................................4
Cancer colorectal et syndrome de Lynch .................................................................................................................................................. 4
Stratification pour le syndrome de Lynch dans le cancer colorectal ................................................................................................ 4
VENTANA MMR IHC Panel ...........................................................................................................................................................5
Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel pour l’identification du statut MMR et
du syndrome probable de Lynch .................................................................................................................................................................. 5
VENTANA MMR IHC Panel ...........................................................................................................................................................6
Utilisation prévue du VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................................... 6
VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody ............................................................................................. 6
VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody ........................................................................................ 6
VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody .............................................................................. 7
VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody .......................................................................................... 7
VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody................................................................................ 7
Objectif du Guide d’interprétation................................................................................................................................................................ 9
Flux d’échantillon pour la coloration avec le VENTANA MMR IHC Panel ..................................................................................... 10
Évaluation clinique des MMR IHC Assays ............................................................................................................................. 11
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration ............................................................................................................................ 11
Flux d’échantillon des MMR IHC Assays ................................................................................................................................................. 13
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond......................................................................................................................... 14
Contrôle au niveau du système ................................................................................................................................................................... 14
Contrôles positifs internes ............................................................................................................................................................................ 16
Critères de cas de cancer colorectal pour l’évaluation clinique ....................................................................................................... 17
Algorithme de score des MMR IHC Assays ............................................................................................................................................ 18
Arbre décisionnel des MMR IHC Assays ................................................................................................................................................. 19
Cas avec statut MMR Intact ....................................................................................................................................................... 20
Cas de cancer colorectal avec expression de protéines MMR Intacte .......................................................................................... 20
Cas avec statut MMR de Perte.................................................................................................................................................. 24
Cas de cancer colorectal avec perte de l’expression de protéines MMR...................................................................................... 24
Cas difficiles.................................................................................................................................................................................... 28
Coloration de fond non spécifique............................................................................................................................................................. 29
Coloration focale.............................................................................................................................................................................................. 31
Coloration punctiforme .................................................................................................................................................................................. 32
Évaluation clinique de VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ...................................................................................... 33
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration ............................................................................................................................ 33
Flux d’échantillons pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................... 34
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond......................................................................................................................... 35
Contrôle au niveau du système ................................................................................................................................................................... 35
Algorithme de score pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay ............................................................................................ 36
Arbre décisionnel ............................................................................................................................................................................................ 37
Le cas est Négatif pour BRAF V600E ...................................................................................................................................... 38
Cas de cancer colorectal avec statut Négatif pour BRAF V600E ..................................................................................................... 38
Les cas sont Positifs pour BRAF V600E .................................................................................................................................. 40
Cas de cancer colorectal avec statut Positif pour BRAF V600E........................................................................................................ 40
Cas difficiles.................................................................................................................................................................................... 44
1016703FR Guide d’interprétation 2019
2
Coloration de fond non spécifique............................................................................................................................................................. 45
Coloration de fond élevée non spécifique ............................................................................................................................................... 46
Coloration nucléaire ....................................................................................................................................................................................... 47
Coloration focale.............................................................................................................................................................................................. 49
Exemples de cas du VENTANA MMR IHC Panel ................................................................................................................. 50
Stabilité des lames ........................................................................................................................................................................ 54
Références....................................................................................................................................................................................... 55
1016703FR Guide d’interprétation 2019
3
Introduction
Cancer colorectal et syndrome de Lynch
Le cancer colorectal (CCR) est le troisième cancer le plus fréquent chez les hommes et le deuxième chez les femmes,
avec environ 1,4 million de nouveaux cas et 694 000 décès dans le monde en 2012. Les taux d’incidence varient
considérablement selon le lieu : on estime que les taux les plus élevés se produisent en Australie/Nouvelle-Zélande, en
Europe et en Amérique du Nord.1 Aux États-Unis seuls, les CCR représentent 8,0 % de tous les nouveaux cas de cancer
et on estime qu’en 2012, 1,2 million de personnes sont atteintes des cancers du rectum et du côlon.2
Le risque de développer le cancer colorectal est influencé par des facteurs environnementaux (p. ex. des facteurs
alimentaires, l’obésité, le tabagisme et la consommation d’alcool) et par des facteurs génétiques. Bien que la majorité
des cas de CCR sont de nature sporadique, 5 à 10 % des cas sont dus à des mutations héréditaires autosomiques
dominantes.3 Le sous-type le plus courant de CCR héréditaire est le syndrome de Lynch, qui représente 3 % de tous les
diagnostics de CCR.4
Le syndrome de Lynch (cancer du côlon héréditaire non polyphasique, HNPCC) a été décrit dans les années 1960 et un
lien a été fait entre la perte de la fonction de réparation des mésappariements de l’ADN (MMR) et le cancer.5 La perte
de toute protéine MMR (MLH1, PMS2, MSH2 ou MSH6) peut entraîner une instabilité des microsatellites et un risque
accru non seulement de cancer colorectal mais aussi de cancer de l’estomac, du cerveau, de la peau, de l’endomètre et
des ovaires. Les patients atteints du syndrome de Lynch ont un risque à vie de 40 à 60 % de développer le cancer
colorectal.6
Stratification pour le syndrome de Lynch dans le cancer colorectal
En utilisant des dosages IHC pour MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6, le statut MMR de la tumeur peut être déterminé. La
détection des quatre protéines dans la tumeur indique un état de réparation de mésappariement normal ou compétent
(pMMR). La perte de l’expression de MLH1 s’accompagne presque toujours de la perte de son partenaire hétérodimère,
PMS2. Dans les occurrences sporadiques de CCR, l’expression du gène MLH1 peut être supprimée par la méthylation
de son promoteur.
Si le résultat indique une perte de la protéine MLH1, un test pour voir si la mutation BRAF V600E est présente stratifiera
la tumeur comme sporadique ou comme un syndrome de Lynch probable et indiquera la nécessité d’un test
supplémentaire de l’état de méthylation du promoteur MLH1. La présence de la mutation BRAF V600E avec perte de la
protéine MLH1 indique que la tumeur est le résultat d’un événement sporadique et fait du syndrome de Lynch une
cause sous-jacente de la tumeur maligne très peu probable.5 Si la mutation BRAF V600E et la méthylation du promoteur
1016703FR Guide d’interprétation 2019
4
MLH1 sont négatives, le statut de réparation de mésappariement d’ADN déficient (dMMR) est compatible avec le
syndrome de Lynch et justifie un test génétique pour obtenir un diagnostic de confirmation.5
L’utilisation de l’IHC pour la détection des protéines PMS2, MSH2 et MSH6 est un indicateur plus direct du statut
mutationnel de la lignée germinale. La perte de PMS2 en présence de l’expression MLH1 ou la perte des expressions
MSH2 ou MSH6 indique que la tumeur est dMMR et est compatible avec le syndrome de Lynch. Toutes les personnes
atteintes du syndrome présumé de Lynch doivent être orientées vers un conseil génétique et d’autres tests génétiques
pour confirmer la présence de la mutation présumée.
VENTANA MMR IHC Panel
Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel pour l’identification du statut MMR et du
syndrome probable de Lynch
Le VENTANA MMR IHC Panel (VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-PMS2
(A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody,
VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse
Monoclonal Primary Antibody) permet l’identification des patients atteints d’une carence en MMR et la stratification du
cancer colorectal (CCR) en forme sporadique ou syndrome de Lynch probable. Ceci est résumé à la Figure 1.
Figure 1 : Utilisation du VENTANA MMR IHC Panel
1016703FR Guide d’interprétation 2019
5
VENTANA MMR IHC Panel
Utilisation prévue du VENTANA MMR IHC Panel
VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody
Le VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1)) est conçu
pour la détection qualitative de la protéine MLH1 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine.
L’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX avec
le OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires.
L’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA anti-PMS2
(A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary
Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)
Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en
protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome
de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de
différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine
MLH1.
Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les
informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés.
Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV).
VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody
Le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4)) est
conçu pour la détection qualitative de la protéine PMS2 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine.
L’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX
avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit, l’Optiview Amplification Kit et les réactifs accessoires.
L’anticorps VENTANA anti-PMS2 (A16-4) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary
Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)
Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en
protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome
de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de
différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine
MLH1.
Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les
informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés.
Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV).
1016703FR Guide d’interprétation 2019
6
VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody
Le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G2191129)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine MSH2 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en
paraffine. L’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark
ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires.
L’anticorps VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA
anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary
Antibody, le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)
Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en
protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du syndrome
de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin de
différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine
MLH1.
Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les
informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés.
Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV).
VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody
Le VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93)) est
conçu pour la détection qualitative de la protéine MSH6 dans des coupes de tissu fixé au formol et inclus en paraffine.
L’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93) est prêt pour l’utilisation avec les instruments BenchMark ULTRA, XT et GX
avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires.
L’anticorps VENTANA anti-MSH6 (SP93) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary
Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-BRAF V600E
(VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence
en protéine de réparation des mésappariements en tant que test pour l’identification des individus à risque du
syndrome de Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR), et avec le statut BRAF V600E afin
de différencier entre les CCR de syndromes sporadiques et probables de Lynch en l’absence d’expression de la protéine
MLH1.
Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les
informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés.
Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV).
VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody
Le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) Mouse Monoclonal Primary Antibody (l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E
(VE1)) est conçu pour la détection qualitative de la protéine BRAF V600E dans des coupes de tissu fixé au formol et
1016703FR Guide d’interprétation 2019
7
inclus en paraffine. L’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) est prêt pour l’utilisation avec les instruments
BenchMark ULTRA, XT et GX avec l’OptiView DAB IHC Detection Kit et les réactifs accessoires.
L’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) fait partie du VENTANA MMR IHC Panel qui comprend le VENTANA antiMLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody, le VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary
Antibody, le VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody et le VENTANA anti-MSH6 (SP93)
Rabbit Monoclonal Primary Antibody. Le VENTANA MMR IHC Panel est indiqué pour la détection de la carence en
protéine de réparation de mésappariement en tant que test pour l’identification des individus à risque de syndrome de
Lynch chez les patients diagnostiqués avec un cancer colorectal (CCR) et, avec le statut BRAF V600E, comme aide à la
différenciation entre le CCR sporadique et un syndrome de Lynch probable en l’absence de l’expression de la
protéine MLH1.
Ces produits doivent être interprétés par un pathologiste qualifié, de concert avec l’examen histologique, les
informations cliniques pertinentes et les contrôles appropriés.
Pour utilisation en diagnostic in vitro (DIV).
1016703FR Guide d’interprétation 2019
8
Objectif du Guide d’interprétation
Ce guide vise à aider les pathologistes lors de l’évaluation clinique des coupes de tissu de carcinome colorectal fixées
au formol, incluses en paraffine (FFPE) et colorées avec les dosages qui comprennent le VENTANA MMR IHC Panel
conformément à l’étiquetage prévu du produit. Plus précisément, ce guide :
·
Contient des clichés photographiques qui illustrent les profils et intensités de coloration susceptibles de
résulter de la coloration des tissus de carcinome avec les dosages qui comprennent le VENTANA MMR IHC
Panel.
·
Fournit une référence pour associer des profils et intensités de coloration à des scores cliniques spécifiques de
biomarqueur MMR.
·
Donne des exemples de cas difficiles à déterminer.
·
Discute d’autres contrôles susceptibles d’être utilisés avec le dosage mais qui ne sont pas fournis par Ventana.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
9
Flux d’échantillon pour la coloration avec le VENTANA MMR IHC Panel
Tissue sample of colorectal carcinoma is taken from the patient, fixed in 10% neutral buffered formalin for 6-48 hours according to standard lab
practices and embedded in paraffin.
Sections 4-5 microns in thickness are mounted on positively charged slides.
One section is stained with H&E.
Repeat Staining
NO
Is the H&E slide
acceptable? (≥ 50
viable tumor cells)
YES
For each assay in the VENTANA MMR IHC Panel:
(1) One section is stained with a one of the following:
VENTANA anti-MLH1(M1)
VENTANA anti-PMS2(A16-4)
VENTANA anti MSH2 (G219-1129)
VENTANA anti-MSH6 (SP93)
VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)
(2) One section is stained with a negative reagent control antibody (corresponding to the species of the respective VENTANA MMR IHC Panel
assay) in the same staining run.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
10
Évaluation clinique des MMR IHC Assays
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration
Les cellules marquées avec les dosages IHC pour les quatre protéines MMR (MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6) sont
évaluées pour détecter la présence ou la perte des signaux diaminobenzidine (DAB). Dans le carcinome colorectal, la
coloration immunohistochimique des quatre protéines MMR suit un profil de coloration nucléaire. Dans les cas de CCR
avec syndrome de Lynch ou mutations somatiques, la perte de l’une des quatre protéines MMR détectée par les MMR
IHC Assays est observée dans les noyaux des cellules tumorales. Le signal est catégorisé comme Intact ou comme Perte
en fonction de la localisation nucléaire uniquement.
·
Un signal positif (Intact) est caractérisé par des cellules tumorales qui présentent une coloration nucléaire
univoque d’une quelconque intensité au-dessus du fond.
·
Une intensité de signal négative (Perte) est caractérisée par l’absence de signal détectable ou par une
décoloration gris pâle ou beige du noyau des cellules tumorales.
Le signal DAB peut être réparti de manière homogène, avec un niveau uniforme d’intensité dans toutes les parties
néoplasiques de la tumeur ou distribué de manière hétérogène avec plus d’un niveau d’intensité. Un anticorps de
contrôle négatif correspondant à l’espèce sert à évaluer la présence d’une coloration de fond dans les échantillons
testés et établir une intensité de coloration de référence.
Chaque dosage nécessite trois coupes de tissus en série de chaque échantillon de tissu, une coupe pour la coloration
hématoxyline et éosine (H&E), une deuxième coupe pour la coloration avec l’anticorps de réactif de contrôle négatif et
une troisième coupe pour la coloration avec un des anticorps MMR. Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR
intact peut être utilisé comme un contrôle positif au niveau du système.
Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon du patient n’est pas adéquat (par exemple si moins de 50 cellules de
tumeur viables sont présentes), un nouvel échantillon doit alors être prélevé. La coloration d’un échantillon pour un
dosage spécifique IHC de MMR au sein du panel (par ex. l’anticorps VENTANA anti-MLH1 (M1)) doit être répétée sur
des lames non colorées si 1) la lame de contrôle positif au niveau du système colorée par ce dosage ne présente pas de
coloration acceptable ; 2) la lame du cas colorée avec un réactif de contrôle négatif adapté à ce dosage ne présente
pas de coloration acceptable ou 3) la lame du cas colorée avec ce dosage spécifique IHC de MMR (par ex. l’anticorps
VENTANA anti-MLH1 (M1)) ne peut pas être évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison
d’une absence de coloration dans les cellules de contrôle positif interne, d’artefacts, d’effets de contour, d’une nécrose,
d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique. Si les
1016703FR Guide d’interprétation 2019
11
contrôles sont acceptables et si la lame colorée à l’aide du dosage VENTANA MMR peut faire l’objet d’une évaluation,
elle peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères d’évaluation.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
12
Flux d’échantillon des MMR IHC Assays
THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH SLIDE STAINED WITH A MMR IHC ASSAY FROM THE VENTANA MMR IHC
PANEL
Repeat staining that
specimen slide.
NO
Is the negative reagent control slide
acceptable?
YES
Repeat staining for
that specimen slide.
NO
Is the specific MMR assay stained slide
acceptable?
YES
A trained pathologist determines the clinical status for the specific MMR assay (eg.VENTANA anti-MLH1 (M1)) according to the scoring algorithm for the MMR
assays that are part of the VENTANA MMR IHC Panel
1016703FR Guide d’interprétation 2019
13
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond
L’acceptabilité de la morphologie et du fond est évaluée pour chaque cas de lame colorée avec un dosage IHC de MMR
à l’aide des critères figurant ci-dessous au tableau 1.
Tableau 1 : Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond
Morphologie
Présentation
Acceptable
Inacceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt sont
Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont
visualisés, ce qui permet une
pas visualisés, ce qui compromet
interprétation clinique de la coloration
l’interprétation clinique de la coloration
Le fond ne compromet pas
Le fond compromet la capacité
l’interprétation clinique de la
d’interpréter la coloration
coloration
Contrôle au niveau du système
Un tissu de contrôle positif connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients, doit être testé pour
chaque ensemble de conditions de test et lors de chaque procédure de coloration réalisée avec l’anticorps IHC de MMR
afin de servir de contrôle au niveau du système. Le tissu de contrôle doit être un prélèvement récent de biopsie ou de
chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière identique aux échantillons de patients. Ce tissu sert à
contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée
différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle pour les réactifs et la coloration, mais non pour la
fixation ou préparation des tissus. Un tissu positif avec coloration modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas
qui présente une coloration forte car il pourra être utilisé pour détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs
ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à l’instrument. Le tissu de contrôle positif peut être sur la même
lame que le cas du patient ou sur une lame séparée qui est colorée dans le même programme que le cas du patient.
Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR clinique IHC Intact peut être utilisé comme un contrôle positif au niveau
du système. En variante, un tissu d’un côlon normal pré-qualifié, fixé et traité de la même manière que le tissu du
patient, peut également être utilisé comme contrôle positif au niveau du système. Une coloration acceptable avec un
contrôle au niveau du système confirmera que tous les réactifs pour ce dosage IHC MMR particulier (par ex., VENTANA
anti-MLH1 (M1) antibody) ont été appliqués et que l’instrument a fonctionné correctement. Le tissu de contrôle positif
doit servir uniquement à vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments sont
correctes, et non comme une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
14
Un tissu CCR pré-qualifié avec un statut MMR clinique IHC de Perte peut être utilisé comme un contrôle négatif au
niveau du système. Puisque les protéines MLH1, PMS2, MSH2 et MSH6 sont exprimées dans tous les tissus, un
contrôle normal de tissu négatif n’existe pas pour ces biomarqueurs. Le tissu de contrôle négatif doit servir uniquement
à vérifier que les performances des tissus traités, des réactifs de test et des instruments sont correctes, et non comme
une aide à la formulation d’un diagnostic spécifique sur des échantillons de patients.
Tableau 2 : Critères de coloration pour un contrôle positif au niveau du système
Profil de
coloration
intact
Acceptable
Une coloration nucléaire univoque
dans des cellules tumorales viables,
en présence de contrôles positifs
internes (coloration nucléaire dans les
lymphocytes, les fibroblastes ou
l’épithélium normal à proximité de la
tumeur)
1016703FR Guide d’interprétation 2019
Inacceptable
Une perte univoque de la coloration
nucléaire ou une coloration nucléaire
focale de faible équivoque dans les
cellules tumorales viables en présence
de contrôles positifs internes
15
Contrôles positifs internes
Dans les échantillons de carcinome colorectal, une coloration nucléaire univoque dans les lymphocytes, les fibroblastes
ou l’épithélium normal à proximité de la tumeur servira de contrôles positifs internes. Des images représentatives du
contrôle interne pour les dosages d’IHC de MMR sont illustrées ci-dessous dans la Figure 2.
H&E 10x
MLH1 10x
Ctrl nég. 10x
MSH2 10x
Figure 2 : Contrôles positifs internes Une forte coloration des fibroblastes (indiquée par les flèches bleues) est illustrée
dans un cas de statut de perte MLH1 et dans un cas de statut intact MSH2.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
16
Critères de cas de cancer colorectal pour l’évaluation clinique
Le Tableau 3 résume les critères pour qu’une lame de tissu CCR soit évaluée pour le statut de MMR avec n’importe
lequel des dosages d’IHC de MMR.
Tableau 3 : Critères évaluables et non évaluables
Interprétation
clinique
Profil de coloration
1) H&E comporte (≥ 50 cellules tumorales viables)
2) La lame de réactif de contrôle négatif est acceptable
Évaluable (tous les
éléments doivent être
vrais)
3) La morphologie est acceptable
4) Le fond est acceptable
5) Le contrôle au niveau du système est acceptable
6) Les contrôles positifs internes ont une coloration nucléaire univoque
1) H&E comporte < 50 cellules tumorales viables
2) La lame de réactif de contrôle négatif est inacceptable
Non évaluable (si un
critère de cette section
est vrai, la coloration de
la lame doit être refaite)
3) La morphologie est inacceptable
4) Le fond est inacceptable
5) Le contrôle au niveau du système est inacceptable
6) Les contrôles positifs internes n’ont pas de coloration nucléaire univoque
7) L’interprétation n’est pas possible en raison d’une perte de tissu, d’une absence
de tumeur, d’artéfacts et/ou de contours d’artéfacts.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
17
Algorithme de score des MMR IHC Assays
Le statut clinique est attribué par un pathologiste qualifié en fonction de l’évaluation de la présence ou de l’absence de
coloration spécifique avec les quatre dosages IHC de MMR du VENTANA MMR IHC Panel. Un statut clinique d’Intact
est attribué aux cas avec présence de coloration nucléaire pour les quatre marqueurs et un statut clinique de Perte est
attribué aux cas sans coloration nucléaire de marqueur.
L’interprétation clinique des cas de carcinome colorectal colorés avec les dosages IHC de MMR doit se baser sur les
critères figurant au Tableau 4 ci-dessous. Des images de divers profils de coloration Intact et de Perte sont fournies
après le tableau.
Tableau 4 : Critères d’interprétation clinique pour les MMR IHC Assays
Expression de protéines Intacte
Expression de protéines de Perte
Une coloration nucléaire univoque dans des
cellules tumorales viables, en présence de
contrôles positifs internes acceptables
(coloration nucléaire dans les lymphocytes,
les fibroblastes ou l’épithélium normal à
proximité de la tumeur)
Une perte univoque de la coloration
nucléaire ou une coloration nucléaire focale
de faible équivoque dans les cellules
tumorales viables en présence de contrôles
positifs internes
Si les témoins positifs internes ne présentent pas de coloration nucléaire univoque et/ou si la coloration de fond
interfère avec l’interprétation, le test doit être considéré comme inacceptable et doit être refait. Une coloration
nucléaire punctiforme de cellules tumorales doit être considérée comme un résultat négatif (perte). Dans les cas de
coloration focale des cellules tumorales, l’intensité de la coloration nucléaire doit être au moins identique à celle des
contrôles positifs internes ainsi qu’à la coloration confluente/continue des noyaux dans quelques glandes ou nids
épithéliaux pour que le cas reçoive un statut clinique d’Intact. En l’absence de ces éléments, le cas doit recevoir un
statut clinique de Perte.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
18
Arbre décisionnel des MMR IHC Assays
Les lames colorées avec les dosages MMR IHC doivent être évaluées à l’aide des critères d’interprétation clinique
(Tableau 4). L’approche à adopter est résumée dans l’arbre décisionnel ci-dessous.
THE FOLLOWING SHOULD BE EVALUATED FOR EACH MMR ASSAY IN THE VENTANA MMR IHC PANEL
Is the negative reagent
control slide acceptable?
NO
Repeat
Staining or
request a
new
specimen.
YES
Is the marker from the
VENTANA MMR IHC
Panel slide evaluable?
YES
Case is Intact for that
VENTANA MMR IHC
Marker
YES
Does the tumor have
unequivocal nuclear
staining?
No
Case is Loss for that
VENTANA MMR
IHC Marker
Is one marker in the
VENTANA MMR IHC
Panel Loss?
Are all 4 markers in the
VENTANA MMR IHC
Panel Intact?
NO
YES
YES
Case is Intact for
VENTANA MMR IHC
Status
Case is Loss for
VENTANA MMR IHC
Status
1016703FR Guide d’interprétation 2019
Case is Loss for
VENTANA MMR IHC
Status
19
Cas avec statut MMR Intact
Cas de cancer colorectal avec expression de protéines MMR Intacte
Un résultat de coloration de statut intact est caractérisé par la présence d’un signal nucléaire détectable en présence
de contrôles internes colorés de manière appropriée.
H&E 4x
MLH1 4x
Ctrl nég. 4x
MLH1 10x
Figure 3 : Le tissu au statut Intact MLH1 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de
contrôles internes colorés de manière appropriée.
H&E 4x
PMS2 4x
Ctrl nég. 4x
PMS2 10x
Figure 4 : Le tissu avec statut Intact PMS2 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de
contrôles internes colorés de manière appropriée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
21
H&E 4x
MSH2 4x
Ctrl nég. 4x
MSH2 10x
Figure 5 : Le tissu avec statut Intact MSH2 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de
contrôles internes colorés de manière appropriée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
22
H&E 4x
MSH6 4x
Ctrl nég. 4x
MSH6 10x
Figure 6 : Le tissu avec statut Intact MSH6 présente une forte coloration nucléaire des cellules tumorales en présence de
contrôles internes colorés de manière appropriée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
23
Cas avec statut MMR de Perte
Cas de cancer colorectal avec perte de l’expression de protéines MMR
Un résultat de coloration de statut de perte est caractérisé par l’absence de signal nucléaire détectable en présence de
contrôles internes colorés de manière appropriée.
H&E 4x
MLH1 4x
Ctrl nég. 4x
MLH1 10x
Figure 7 : Le tissu avec statut de Perte MLH1 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en présence
de contrôles internes colorés de manière appropriée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
24
H&E 4x
PMS2 4x
Ctrl nég. 4x
PMS2 10x
Figure 8 : Le tissu avec statut de Perte PMS2 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en présence
de contrôles internes colorés de manière appropriée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
25
H&E 4x
MSH2 4x
Ctrl nég. 4x
MSH2 10x
Figure 9 : Le tissu avec statut de Perte MSH2 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales mais
présente une faible coloration cytoplasmique en présence de contrôles internes colorés comme il convient. Il convient de ne
pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique lors de l’interprétation du statut.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
26
H&E 4x
MSH6 4x
Ctrl nég. 4x
MSH6 10x
Figure 10 : Le tissu avec statut de Perte MSH6 ne présente aucune coloration nucléaire des cellules tumorales en
présence de contrôles internes colorés comme il convient.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
27
Cas difficiles
Les cas de cancer colorectal sont catégorisés comme Intact ou Perte pour un dosage IHC de MMR en fonction de la
présence ou de l’absence de coloration sur toute la surface de la tumeur. La coloration peut varier en intensité et cette
intensité peut ne pas être uniforme dans toute la tumeur ; toutefois, cela n’a pas d’effet sur le statut MMR.
Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants :
§
Fond non spécifique
Certains échantillons peuvent présenter une coloration de fond non spécifique pour des raisons qui ne sont
pas bien comprises. Pour cette raison, l’évaluation d’une lame d’IHC de MMR doit inclure une comparaison de
la lame avec la lame de contrôle de réactif négatif pour déterminer le niveau de coloration de fond non
spécifique. Il convient de ne pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique, le cas échéant, lors de
l’interprétation de l’IHC de MMR.
§
Coloration focale
Certains échantillons peuvent présenter une coloration focale dans les cellules tumorales ; l’intensité de la
coloration peut varier de faible à forte. En fonction de l’algorithme de score IHC de MMR, une coloration
nucléaire focale de faible équivoque dans les cellules tumorales viables en présence de contrôles positifs
internes doit être classée comme Perte.
§
Coloration punctiforme
Certains échantillons peuvent présenter une coloration discrète punctiforme au sein de quelques noyaux
tumoraux ; l’intensité de la coloration peut varier de faible à forte. Il convient de ne pas tenir compte de ce
profil de coloration et si un cas ne présente que ce type de profil de coloration, il doit recevoir un statut clinique
de Perte.
§
Artéfact des tissus ou de la coloration
Les artéfacts histologiques dus aux processus de traitement et de microtomie des échantillons peuvent
également compliquer la détermination d’un score clinique IHC de MMR. Ces artéfacts peuvent comprendre
sans s’y limiter : les gradients de fixation et les effets de contour, le piégeage DAB, la formation de bulles
nucléaires, l’absence de coloration dans certaines régions des tissus, le déchirement ou le pliage des tissus et
la perte de coupe tissulaire. Dans certains cas, il peut s’avérer nécessaire de répéter la coloration de nouvelles
coupes ou d’obtenir un nouvel échantillon.
Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
28
Coloration de fond non spécifique
H&E 4x
MSH2 4x
Ctrl nég. 4x
MSH2 10x
Figure 11 : Le tissu avec statut Intact MSH2 présente une forte coloration nucléaire en présence de contrôles internes
colorés comme il convient ; on aperçoit une coloration de fond cytoplasmique dans les cellules tumorales dont il ne faut pas
tenir compte.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
29
H&E 4x
MSH2 4x
Ctrl nég. 4x
MSH2 10x
Figure 12 : Le tissu avec statut de Perte MSH2 présente un fond cytoplasmique beige pâle des cellules tumorales ;
toutefois, il n’y a pas de coloration nucléaire dans la tumeur en présence de contrôles internes positifs colorés comme il
convient. Il convient de ne pas tenir compte d’une coloration cytoplasmique lors de l’interprétation du statut.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
30
Coloration focale
H&E 4x
MSH6 4x
Ctrl nég. 4x
MSH6 10x
Figure 13 : Le tissu avec statut de Perte MSH6 présente une faible coloration nucléaire équivoque des cellules
tumorales viables en présence de contrôles internes positifs colorés comme il convient. Notez également que l’intensité
de la coloration nucléaire focale est inférieure à celle des contrôles positifs internes et non confluente autour de la
glande.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
31
Coloration punctiforme
H&E 10x
MLH1 10x
Ctrl nég. 10x
MLH1 20x
Figure 14 : La tumeur du tissu avec statut de Perte MLH1 présente une forte coloration punctiforme des noyaux de
quelques cellules tumorales ; toutefois, il n’y a pas de cellules dans la tumeur qui présentent une coloration nucléaire
univoque en présence de contrôles internes positifs colorés comme il convient.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
32
Évaluation clinique de VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay
Évaluation des profils et de l’intensité de coloration
Dans le carcinome colorectal, les cellules néoplasiques marquées avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1)
sont évaluées afin de détecter la présence ou l’absence du signal diaminobenzidine (DAB). La coloration
immunohistochimique du carcinome colorectal suit un modèle de coloration cytoplasmique
·
Un signal positif est caractérisé par des cellules qui présentent une coloration cytoplasmique univoque ;
l’intensité peut varier de faible à modérée.
·
Une intensité de signal négative est caractérisée par l’absence de tout signal détectable. Les cas négatifs
peuvent encore présenter une décoloration cytoplasmique gris pâle ou beige.
Le signal peut être réparti de manière homogène, avec un niveau uniforme d’intensité dans toutes les parties
néoplasiques de la tumeur ou distribué de manière hétérogène avec plus d’un niveau d’intensité. Un anticorps de
contrôle négatif correspondant à l’isotype est utilisé pour évaluer la présence d’une coloration de fond dans les
échantillons testés et établir une intensité de coloration de référence.
Le dosage anti-BRAF V600E (VE1) IHC nécessite une coupe de tissu en série pour la coloration hématoxyline et éosine
(H&E), une deuxième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps de réactif de contrôle négatif et une
troisième coupe de tissu en série pour la coloration avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Un cancer
colorectal qui teste positif pour la mutation BRAF V600E à l’aide de l’IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E
(VE1) peut servir de contrôle au niveau du système. Si l’évaluation H&E indique que l’échantillon du patient n’est pas
adéquat (par exemple si moins de 50 cellules de tumeur viables sont présentes), un nouvel échantillon doit alors être
prélevé. La coloration d’un échantillon doit être répétée sur des lames non colorées si 1) la lame de contrôle positif au
niveau du système ne présente pas de coloration acceptable ; 2) la lame du cas d’anticorps de réactif de contrôle
négatif ne présente pas de coloration acceptable ou 3) la lame du cas colorée avec BRAF V600E ne peut pas être
évaluée. Si la dernière de ces lames ne peut pas être interprétée en raison d’artefacts, d’effets de contour, d’une
nécrose, d’un manque de tissu, ou pour toute autre raison, alors la lame ne peut être utilisée pour l’évaluation clinique.
Si les contrôles sont acceptables et si la lame IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) peut faire l’objet
d’une évaluation, elle peut être évaluée par un pathologiste qualifié comme indiqué dans les Critères d’évaluation.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
33
Flux d’échantillons pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay
1016703FR Guide d’interprétation 2019
34
Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond
L’acceptabilité de la morphologie et du fond du tissu est évaluée pour chaque cas de patient à l’aide des critères
figurant au Tableau 5.
Tableau 5 : Critères d’acceptabilité de la morphologie et du fond
Morphologie
Présentation
Acceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt sont
visualisés, ce qui permet une
interprétation clinique de la coloration
Inacceptable
Les éléments cellulaires d’intérêt ne sont
pas visualisés, ce qui compromet
l’interprétation clinique de la coloration
Le fond ne compromet pas
l’interprétation clinique de la
coloration
Le fond compromet la capacité
d’interpréter la coloration
Contrôle au niveau du système
Un tissu de contrôle au niveau du système connu, fixé et traité de la même manière que les échantillons de patients,
doit être testé pour chaque protocole de coloration réalisé avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Le tissu
de contrôle doit être un prélèvement récent de biopsie ou de chirurgie, préparé et fixé dès que possible d’une manière
identique aux échantillons de patients. Ce tissu sert à contrôler toutes les étapes de traitement et de coloration des
échantillons. Une coupe de tissu fixée ou traitée différemment de l’échantillon testé peut être utilisée comme contrôle
pour les réactifs et la coloration, mais non pour la fixation ou préparation des tissus. Un tissu positif avec coloration
modérée est plus adapté au contrôle qualité qu’un cas qui présente une coloration forte car il pourra être utilisé pour
détecter des niveaux mineurs de dégradation des réactifs ou des problèmes hors spécifications pouvant être liés à
l’instrument. Le tissu de contrôle au niveau du système peut être testé sur la même lame que le cas du patient ou sur
une lame séparée qui est testée au même moment que le cas du patient.
Un contrôle au niveau du système positif constituerait un cas préqualifié de CCR qui teste positif pour la mutation BRAF
V600E par IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). La coloration d’un cas de tissu de cancer colorectal
avec la mutation BRAF V600E confirmera que tous les réactifs ont été appliqués et que l’appareil fonctionne
correctement. Le tissu de contrôle positif ne doit être utilisé que pour contrôler les performances et non pour aider à
établir un diagnostic clinique des échantillons de patients.
Un contrôle au niveau du système négatif constituerait un cas préqualifié de CCR qui teste négatif pour le négatif IHC
de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1). Le tissu de contrôle négatif ne doit être utilisé que pour contrôler les
performances et non pour aider à établir un diagnostic clinique des échantillons de patients.
Les tissus de contrôle sur chaque lame colorée par l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) seront jugés
acceptables ou inacceptables par les pathologistes examinateurs selon les critères figurant au Tableau 6.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
35
Tableau 6 : Critères de coloration pour un contrôle positif au niveau du système
Acceptable
Inacceptable
Tissus de cancer
Coloration cytoplasmique univoque d’une
Absence de coloration ou coloration
colorectal
quelconque intensité dans les cellules
cytoplasmique équivoque dans des cellules
tumorales viables au-dessus du fond.
tumorales viables.
Fibroblastes et
Pas de coloration ou coloration cytoplasmique
Coloration cytoplasmique univoque dans les
lymphocytes dans
équivoque dans les fibroblastes et
fibroblastes et les lymphocytes dans
un épithélium
lymphocytes dans l’épithélium normal.
l’épithélium normal.
normal
Algorithme de score pour le VENTANA anti-BRAF V600E IHC Assay
Le statut IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) est attribué par un pathologiste qualifié en fonction de
son évaluation de l’intensité de la coloration spécifique pour le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) tel qu’illustré au
Tableau 7 ci-dessous. Un statut positif est attribué aux cas avec coloration positive et un statut négatif aux cas sans
coloration.
L’interprétation clinique des cas de carcinome colorectal colorés avec l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) doit
s’effectuer en fonction des critères figurant au Tableau 7. Les images de divers profils de coloration négatifs et positifs
sont fournies après le Tableau 7.
Tableau 7 : Critères d’interprétation clinique pour le VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) IHC Assay
Positif pour la mutation BRAF V600E.
Coloration cytoplasmique univoque d’une quelconque
intensité dans les cellules tumorales viables au-dessus
du fond.
Négatif pour la mutation BRAF V600E.
Absence de coloration ou coloration
cytoplasmique équivoque dans des cellules
tumorales viables.
Remarque : Une coloration nucléaire, une
coloration faible à forte de cellules tumorales
viables isolées ou de petits groupes de tumeurs
doit être considérée comme négative.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
36
Arbre décisionnel
1016703FR Guide d’interprétation 2019
37
Le cas est Négatif pour BRAF V600E
Cas de cancer colorectal avec statut Négatif pour BRAF V600E
Un résultat négatif de coloration est caractérisé par l’absence de tout signal détectable. Les cas négatifs peuvent
encore présenter une décoloration cytoplasmique gris pâle ou beige.
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 15 : Le tissu à statut négatif BRAF V600E ne présente aucune coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
38
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 16 : Le tissu à statut Négatif BRAF V600E présente un blush cytoplasmique léger.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
39
Les cas sont Positifs pour BRAF V600E
Cas de cancer colorectal avec statut Positif pour BRAF V600E
Un résultat de coloration positive est caractérisé par des cellules qui présentent une coloration cytoplasmique
univoque ; l’intensité peut varier de faible à modérée.
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 17 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une faible coloration cytoplasmique.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
40
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 18 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une coloration cytoplasmique faible à modérée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
41
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 19 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une coloration cytoplasmique modérée.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
42
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 20 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une forte coloration cytoplasmique.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
43
Cas difficiles
Certains cas peuvent être particulièrement compliqués en raison des facteurs suivants :
§
Fond non spécifique
Certains échantillons peuvent présenter une coloration de fond non spécifique pour des raisons qui ne sont
pas bien comprises. Il a été démontré que l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) met parfois en
évidence une coloration cytoplasmique parasite dans les muscles lisses et une coloration nucléaire dans les
cellules épithéliales du côlon non cancéreuses, les entérocytes, les cellules de Leydig des testicules, les
surrénales, l’hypophyse et certaines cellules tumorales. Ces cas ne doivent toutefois pas être considérés
comme positifs pour la mutation BRAF V600E. Cet anticorps colore également les cils vibratiles du poumon.
Pour cette raison, l’évaluation d’une lame colorée à l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1) doit inclure
une comparaison de la lame avec la lame de contrôle négative pour déterminer le niveau de coloration de fond
non spécifique.
§
Coloration nucléaire
Certains échantillons peuvent ne présenter qu’une coloration nucléaire. En fonction de l’algorithme de score
IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1), ces cas doivent être considérés comme négatifs.
§
Artéfact des tissus ou de la coloration
Les artéfacts histologiques dus aux processus de traitement et de microtomie des échantillons peuvent
également compliquer la détermination du statut clinique IHC de l’anticorps VENTANA anti-BRAF V600E (VE1).
Ces artéfacts peuvent comprendre sans s’y limiter : les gradients de fixation et les effets de contour, le
piégeage DAB, la formation de bulles nucléaires, l’absence de coloration dans certaines régions des tissus, le
déchirement ou le pliage des tissus et la perte de coupe tissulaire. Dans certains cas, il peut s’avérer nécessaire
de répéter la coloration de nouvelles coupes ou d’obtenir un nouvel échantillon.
§
Coloration hétérogène
Certains cas peuvent présenter seulement une coloration cytoplasmique focale, mais univoque. Ces cas sont
difficiles et des tests supplémentaires peuvent être envisagés (Fig. 25).
Quelques exemples de cas difficiles sont illustrés dans les pages suivantes.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
44
Coloration de fond non spécifique
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 21 : Le tissu à statut Négatif BRAF V600E présente un léger blush cytoplasmique dans toute la tumeur.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
45
Coloration de fond élevée non spécifique
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 22 : Le tissu à statut positif BRAF V600E présente un fond élevé non spécifique en dehors des cellules tumorales.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
46
Coloration nucléaire
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 23 : Le tissu à statut négatif BRAF V600E ne présente aucune coloration cytoplasmique dans les cellules tumorales.
Une coloration nucléaire modérée est présente dans certaines cellules, cependant, en fonction des critères d’interprétation,
seule la coloration cytoplasmique doit servir à déterminer le statut de BRAF V600E.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
47
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 24 : Le tissu à statut positif BRAF V600E présente une forte coloration cytoplasmique univoque dans les cellules
tumorales. Une coloration nucléaire modérée est présente dans certaines cellules, cependant, en fonction des critères
d’interprétation, seule la coloration cytoplasmique doit servir à déterminer le statut de BRAF V600E.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
48
Coloration focale
BRAF V600E 2x
H&E 4x
BRAF V600E 4x
Ctrl nég. 4x
BRAF V600E 10x
Figure 25 : Le tissu à statut Positif BRAF V600E présente une intensité de coloration BRAF V600E hétérogène. Une faible
coloration cytoplasmique équivoque est présente dans la majorité de la tumeur, avec coloration cytoplasmique focale
univoque de modérée à forte.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
49
Exemples de cas du VENTANA MMR IHC Panel
H&E 10x
MLH1 10x
MSH2 10x
Ctrl nég. 10x
PMS2 10x
MSH6 10x
Figure 26 : MMR CCR avec statut compétent Ce cas présente un statut compétent de
réparation des mésappariements d’ADN (pMMR) pour les quatre marqueurs MMR du VENTANA
MMR IHC Panel.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
50
H&E 10x
Ctrl nég. 10x
MLH1 10x
PMS2 10x
MSH2 10x
MSH6 10x
BRAF V600E 10x
Figure 27 : Cariconome du côlon sporadique Ce cas présente un statut de réparation de
mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MLH1 et de PMS2
avec MSH2 et MSH6 intactes. BRAF V600E est positif pour ce cas.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
51
H&E 10x
MLH1 10x
MSH2 10x
Ctrl nég. 10x
PMS2 10x
MSH6 10x
BRAF V600E 10x
Figure 28 : Syndrome de Lynch probable Ce cas présente un statut de réparation de
mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MSH2 et MSH6 avec
MLH1 et PMS2 intactes. BRAF V600E est négatif pour ce cas.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
52
H&E 10x
Ctrl nég. 10x
MLH1 10x
PMS2 10x
MSH2 10x
MSH6 10x
BRAF V600E 10x
Figure 29 : Syndrome de Lynch probable Ce cas présente un statut de réparation de
mésappariement d’ADN déficient (dMMR) en raison de la perte des protéines MLH1 et PMS2 avec
MSH2 et MSH6 intactes, BRAF V600E est négatif pour ce cas.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
53
Stabilité des lames
Ventana préconise le prélèvement de coupes d’environ 4 μm d’épaisseur et leur montage sur des lames chargées
positivement. Les lames doivent être colorées dans les huit semaines suivant la préparation.
Jour 0
Semaine 4
Semaine 10
MLH1
Jour 0
Semaine 4
Semaine 8
PMS2
Jour 0
Semaine 4
Semaine 10
Jour 0
Semaine 4
Semaine 10
Jour 0
Semaine 4
Semaine 10
MSH2
MSH6
BRAF V600E
Figure 30 : Coloration de stabilité de la lame de coupe. Ce panel présente des cas à statut intact pour MLH1,
PMS2, MSH2 et MSH6 et statut positif pour BRAF V600E pour les points de mesure indiqués dans la figure.
1016703FR Guide d’interprétation 2019
54
Références
1.
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Cancer Incidence and Mortality Worldwide: IARC CancerBase No. 11 [Internet]. 2012, Lyon, France : Centre
international de Recherche sur le Cancer (CIRC) ; 2013.
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Lewis DR, Chen HS, Feuer EJ, Cronin KA (éds). SEER Cancer Statistics Review, 1975-2012.2015, National Cancer
Institute. Bethesda, MD.
3.
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Optimisation | Diagnostic du cancer
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